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RecAタンパク質の相同性認識機構に学んだ人工リプレッサーの医薬分子設計

从RecA蛋白的同源识别机制中学习人工阻遏物的药物分子设计

基本信息

批准号：
14771306
负责人：
杉山亨
金额：
$ 2.11万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1 RecAとPNABoc基をPNAの核酸塩基の保護に使った新規PNAモノマーを活用することによって市販のモノマーでは合成が難しいプリンを多く含むが合成可能となり、PNA合成における配列制限を克服した。ホモプリンおよびホモピリミジン配列のPNAは二本鎖DNAに侵入できるが、それに伴って相補鎖と反対のDNA鎖が引き剥がされて一本鎖の領域が生成する。ストランドインベージョンの中間体は不安定で、もとの二本鎖DNAにもどりやすいが、この一本鎖領域を他の分子で覆って逆反応を防げばストランドインベージョンが加速されると考えた。今回、RecAペプチドが一本鎖DNAに優先的に結合する性質を利用して、ストランドインベージョン中間体の安定化を試みた。ホモピリミジンPNAが二本鎖DNAに侵入してできる三重鎖複合体はゲル電気泳動で検出可能なので、この反応系にRecAペプチドを添加してストランドインベージョンの加速効果を調べた。反応条件を種々検討したがRecAペプチドを使ってストランドインベージョンを加速することはできず、むしろ反応を阻害してしまうことがわかった。RecAペプチドが一本鎖DNAほどではないが二本鎖DNAにも結合するため、PNAのDNAへの接近を妨害しているのかも知れない。2 修飾塩基平成15年度にPNAの核酸に対する親和性を高めるためグアニンの2位にスペルミンを導入したPNAモノマーを合成した。本年度はこのモノマーの合成効率を改善して、安定に供給できるようになったので、Fmoc法による固相合成への適用を検討した。縮合にはHATUを使用したが、このモノマーの場合には無保護の二級アミノ基がHATUでアルキル化されるおそれがあるため、PyAOPを用いて縮合反応を行った。以降のオリゴマーの伸長にもPyAOPを使用した。修飾塩基の縮合効率はあまりよくなかったが、HPLC精製後、TOF Massで確認したところ目的のオリゴマーが得られていることがわかった。

1. The protection of PNA nucleic acid groups by recA and PNAB groups makes it possible to overcome the restriction of PNA nucleic acid synthesis by using recA and PNAB groups. The PNA of the two locks is inserted into the DNA of the two locks, and the DNA of the two locks is inserted into the DNA of the two locks. The intermediate is unstable, stable, stable In this paper, we try to stabilize the intermediate of DNA by using the properties of DNA binding. The triple-lock complex is capable of detecting the potential of electrophoresis and adjusting the acceleration effect of the reaction system by adding a new reagent to the triple-lock complex. The condition of the reaction is to accelerate the reaction of the reaction. RecA DNA binding to a single strand of DNA and PNA DNA binding to a single strand of DNA 2. The nucleic acid affinity of PNA is high, and the nucleic acid affinity of PNA is high. This year, the synthesis efficiency of Fmoc was improved, the stability of Fmoc was improved, and the application of Fmoc to solid phase synthesis was discussed. Condensation of HATU in the presence of non-protected secondary groups To reduce the number of people After purification by HPLC, TOF Mass was confirmed.