任意の二重らせんDNAを配列特異的に切断する人工ヌクレアーゼの医薬分子設計

可序列特异性切割任意双链 DNA 的人工核酸酶的药物分子设计

• 批准号: 08772137
• 负责人: 杉山 亨
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08772137/
• 关键词: RecA; チオウラシル; DNA切断

本研究は人工ヌクレアーゼさらには癌遺伝子を標的としたDNA切断分子の開発を目的とした基礎的研究である。天然型DNAを利用した三重らせん法は標的がホモプリン配列に限られるのに対して、RecAタンパク質による相同的対合には塩基配列による制限がないのであらゆるDNA配列に適用可能である。本研究では化合合成した切断部位をDNAオリゴマーに連結し、この上にRecAタンパク質を重合させることにより人工ヌクレアーゼを構築する。RecAへの結合様式、結合力、切断活性に対する化合物の各部分構造の役割を明確にするため構造を少しずつ変える必要があるので、柔軟なpostsynthesis modification法を適用した。具体的には4-チオウラシル残基を含んだオリゴマーを予め合成し、チオカルボニル基の親電子反応剤に対する高い反応性を利用して水溶液中で切断部位を結合させることとした。はじめにS-シアノエチル-2'-デオキシ-4-チオウリジンのジメトキシトリチル体を合成した。文献記載の方法では再現性が乏しかったため合成法を再検討し、市販の2'-デオキシ-4-ウリジンから短工程(途中の精製操作はわずか3回)で合成する方法を開発した。切断はフェナントロリン誘導体による酸化的切断から検討することとし、チオウラシルと共有結合させるためのブロモアセチル基をメチレン鎖を介して1,10-フェナントロリンの2位に導入した化合物を合成した。メチレン鎖の炭素数を変えることにより標的DNAとの距離を調節できる。いずれの化合物も効率よく合成できるようになったので化合物を大量に消費する解析法も問題なく行うことができるようになった。本年度はモノマーおよび修飾試薬の合成が完了したので今後修飾オリゴマーを合成し、DNA切断実験を行う予定である。

The purpose of this study is to investigate the molecular mechanism of DNA cleavage in cancer cells. Objective to study the basis of this study. The natural type of DNA is the same as that of the triple configuration method of the natural DNA, which is the same as that of the triplet method, which is the same as that of the DNA configuration. The purpose of this study is to synthesize and synthesize the parts of the cut-off site, such as DNA, RecA, coincident, artificial, artificial, and so on. The combination formula of RecA, the binding force and the cutting activity of each part of the compound are clearly made in service. It is necessary to use the postsynthesis modification method. The specific amino acid residues of thiazolidins contain synthetic compounds and antioxidants, which are highly sensitive by the combination of the cut-off sites in aqueous solution and the molecular weight. Please do not know what to do with your body. In the literature, there is a lack of information in the literature. The synthesis method is not suitable for further development, and the synthesis method is effective for the short project (3 cycles of intensive operation). Cut off the acid of the body, cut it, cut it, The number of carbon is different. The DNA of carbon is far away from each other. In terms of the rate of synthesis of compounds, there are a large number of compounds that can be used to solve the problem of analytical methods. This year, we are going to make some changes. After we have finished our work, we will make some changes in the future. In the future, we will try to synthesize the products. The DNA will be cut off.