条件的不死化細胞株を用いた脳関門を制御する分子機構の解明

使用条件永生化细胞系阐明调节脑屏障的分子机制

• 批准号: 14771332
• 负责人: 堀 里子
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14771332/
• 关键词: 脳関門; 条件的不死化細胞株; 共培養系; 星状膠細胞; 周皮細胞; ABCトランスポーター; ABCG2; Occludin; P糖蛋白

血液脳関門(BBB)機能は脳毛細血管内皮細胞とその周囲を覆う星状膠細胞や周皮細胞によるパラクライン作用によって制御されるがその機構はほとんど不明である。循環血液から脳へのparacellular輸送を制限する密着結合分子(TJ)、transcellular輸送を担う排出輸送担体は脳への薬物透過性を決定する重要なBBB機能分子である。申請者は昨年度の研究成果として、条件的不死化細胞株を用いた共培養BBBモデルを構築し、TJ分子occludinが周皮細胞由来のangiopoietin-1によって誘導されることを示した。本年度は構築した共培養BBBモデルを用い、薬物排出輸送担体ATP binding cassette (ABC)G2に着目し、ABCG2のラットBBBにおける発現と機能、さらには周囲の細胞による制御機構の解明を目的とした。申請者はABCG2のラットホモログ(rABCG2)を脳毛細血管分画からクローニングした。rABCG2遺伝子導入細胞株を構築し、rABCG2が薬物排出輸送活性をもつことを明らかにした。さらに、免疫組織学的解析からrABCG2がラット脳毛細血管の血管側細胞膜に局在していることを示した。以上から、rABCG2はBBBにおいて薬物を血液中に汲み出す輸送担体として働くことが示唆された。脳毛細血管内皮細胞におけるrABCG2輸送活性及びmRNA量は星状膠細胞由来液性因子によって上昇した。一方、周皮細胞由来液性因子によってはいずれも変化しなかった。以上から、BBBにおけるrABCG2機能は星状膠細胞によって維持されていることが示唆された。本研究から、周囲の細胞によるBBB制御機構として、星状膠細胞由来液性因子がABCG2活性を上昇させる経路、周皮細胞由来angiopoietin-1がTie-2を介しoccludin発現を上昇させる経路が同定された。

Blood 脳 masato door (BBB) function は 脳 capillary endothelial cells と そ の weeks 囲 を fu う stellate glue や week skin cells に よ る パ ラ ク ラ イ ン role に よ っ て suppression さ れ る が そ の institutions は ほ と ん ど unknown で あ る. Circulating blood か ら 脳 へ の paracellular transport limitations を す る indiscrete binding molecules (TJ), transcellular transportation を bear う eduction supporter は 脳 へ の 薬 content through sexual を decided す る important な BBB function molecular で あ る. Applicants は yesterday annual の research と し て, conditions of undead cell lines を い た trained BBB モ デ ル を constructing し, TJ molecules occludin が periderm cell origin の uncomplicated 1 に よ っ て induced さ れ る こ と を shown し た. This year は build し た trained BBB モ デ ル を with い, 薬 discharge conveyor supporter ATP binding cassette (ABC) G2 に し, ABCG2 の ラ ッ ト BBB に お け る 発 と function, now さ ら に は weeks 囲 の cells に よ る system of the royal institution の interpret を purpose と し た. Applicant: グ ABCG2 ラットホモログ ラットホモログ(rABCG2)を脳 capillary subdrawing ら ら ロ ニ ニ グ グ た た. The 伝 plasmid of rABCG2 was introduced into the cell line を for the construction of <s:1> and rABCG2が drug excretion and delivery activity を を に に とを とを and ら に た た. さ ら に, immune histologic analysis か ら rABCG2 が ラ ッ ト 脳 capillary の vascular side membrane に bureau in し て い る こ と を shown し た. Above か ら, rABCG2 は BBB に お い て 薬 content に を blood drawn み out す conveying supporter と し て 働 く こ と が in stopping さ れ た. The transport activity of におけるrABCG2 in 脳 capillary endothelial cells and the amount of びmRNA 脳 stellate glial cells increase the liquid factor によって た た. One side, percutaneous cells are derived from fluid factor によって によって ずれ ずれ ずれ った transformation な な った った. The above ら ら, BBBにおけるrABCG2 function ら stellate glial cells によって maintain されて る る とが とが and された indicate された. This study か ら, zhou 囲 の cells に よ る BBB system of the royal institution と し て, stellate cell origin fluid factor が ABCG2 active を rise さ せ る 経 road, 1 week skin cell origin uncomplicated が Tie - 2 を interface し occludin 発 now rising を さ せ る が 経 road with fixed さ れ た.

项目成果

寺崎哲也: "条件的不死化脳関門細胞株を用いた脳へのDDS研究の新展開"Drug Delivery System. 18・2. 11-18 (2003)

Tetsuya Terasaki：“使用条件永生化脑屏障细胞系的脑DDS研究的新进展”18・2（2003）。

T.Terasaki: "New approaches to in vitro models of blood-brain barrier drug transport"Drug Discovery Today. 20. 944-954 (2003)

T.Terasaki：“血脑屏障药物转运体外模型的新方法”《今日药物发现》。

Nobuo Umeki: "mRNA Expression and Amino Acid Transport Characteristics of Cultured Human Brain Microvascular Endothelial Cells (hBME)"Drug Metab. Pharmacokin. 17・4. 367-373 (2002)

Nobuo Umeki：“培养的人脑微血管内皮细胞 (hBME) 的 mRNA 表达和氨基酸转运特征” Pharmacokin 17・4 (2002)。

寺崎哲也: "血液脳関門輸送系の分子機構と生理的役割"神経免疫学(特集IV:血液脳関門、血液神経関門の基礎と臨床:バリアーの生理と破綻・修復のメカニズムを探る). 11. 227-235 (2003)

寺崎哲也：《血脑屏障转运系统的分子机制和生理作用》神经免疫学（专题四：血脑屏障和血神经屏障的基础和临床实践：探索屏障的生理学和机制故障和修复） 11 。

大槻純男: "血液脳関門の薬物透過と排出の分子機構〜中枢支援防御システム〜"日本薬理学雑誌. 122. 55-64 (2003)

Sumio Otsuki：“药物通过血脑屏障渗透和排泄的分子机制〜中枢支持防御系统〜”日本药理学杂志122. 55-64（2003）。