抗体固定化ポリマーのゲル化を検出原理とした新規イムノアッセイ法の開発

以抗体固定聚合物凝胶化为检测原理开发新的免疫测定方法

• 批准号: 14750646
• 负责人: 宗 伸明
• 金额: $ 2.05万
• 依托单位: Kyushu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14750646/
• 关键词: 抗体; ポリマー; イムノアッセイ; ゲル; 蛍光; コンジュゲート; 蛍光共鳴エネルギー移動

本年度は、抗体固定化ポリマーを用いた新規イムノアッセイ法の開発として、1)蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)を利用した手法の検討、2)場感受性蛍光プローブを利用した手法の詳細な性能検討、を行った。まず1)に関して、前年度までに合成した抗ヒトIgG抗体固定化ポリマーにFITCあるいはTRITCを標識した二種の抗体固定化ポリマーを合成し、これらの存在下において抗原であるヒトIgGを添加したが、予測したFITCからTRITCへのFRETの誘起は観測されなかった。これは、抗体への蛍光基修飾量が少なかったことや抗原のサイズが大きいこと等により両蛍光基が十分に接近できなかったことが原因であると考えられる。以上の結果から、1)の手法が抗体固定化ポリマーを用いたイムノアッセイ法としては不向きであることが示唆された。一方2)に関しては、場感受性蛍光プローブとしてCCVJを用い、前年度までの知見を基にして、更に詳細な検討を行った。まず本手法で用いる抗体固定化ポリマーの抗原認識能を確認するため、表面プラズモン共鳴(SPR)測定を行った。抗原を固定化したSPRセンサチップ上に抗体固定化ポリマーを送入した場合、抗体固定化ポリマーがセンサチップ上を通過するのに対応してSPR角度の上昇が観測され、抗体固定化ポリマー中の抗体が抗原認識能を保持していることを確認できた。次に2)の手法の選択性を検討するため、抗ヒトIgG抗体固定化ポリマーとCCVJの存在下でウサギIgG(40-160μg/mL)を添加した。その結果、抗原であるヒトIgG(40-160μg/mL)を添加した場合と異なり、有意な蛍光強度の増大は観測されず、本手法の選択性が示唆された。従って、本研究で開発した抗体固定化ポリマーと場感受性蛍光プローブを利用したイムノアッセイ法は、新しい有用なイムノアッセイ法として期待できると考えられる。

は this year, the antibody immobilized ポ リ マ ー を with い た new rules イ ム ノ ア ッ セ イ method の open 発 と し て, 1) 蛍 optical resonance エ ネ ル ギ ー mobile (FRET) を using し た gimmick の beg, 2) susceptibility 検 蛍 light プ ロ ー ブ を using し た gimmick の な 検 performance in detail please, を っ た. ま ず 1) に masato し て, former annual ま で に synthetic し た resistance ヒ ト IgG antibody immobilized ポ リ マ ー に FITC あ る い は TRITC を logo し た two の antibody immobilized ポ リ マ ー を synthetic し, こ れ ら の presence に お い て antigen で あ る ヒ ト IgG を add し た が, be し た FITC か ら TRITC へ の FRET の Induce 観 to measure されな った った. こ れ は, antibody へ の 蛍 light base modification fewer が な か っ た こ と や antigen の サ イ ズ が big き い こ と etc に よ り struck 蛍 light が very に closing で き な か っ た こ と が reason で あ る と exam え ら れ る. の above results か ら, 1) の が antibody immobilized ポ リ マ ー を with い た イ ム ノ ア ッ セ イ method と し て は to き で あ る こ と が in stopping さ れ た. A 2) に masato し て は, field sensitivity 蛍 light プ ロ ー ブ と し て CCVJ を い, before the annual ま で の knowledge を base に し て, more に detailed な 検 line for を っ た. ま ず this gimmick で い る antibody immobilized ポ リ マ ー の antigen can know を confirm す る た め, surface プ ラ ズ モ ン resonance (SPR) measurement line を っ た. Antigen を immobilized し た SPR セ ン サ チ ッ プ に antibody immobilized on ポ リ マ ー を into し た occasions, antibody immobilized ポ リ マ ー が セ ン サ チ ッ プ on を through す る の に 応 seaborne し て SPR Angle の rise が 観 measuring さ れ, antibody immobilized ポ リ マ ー が の antibody antigen can know を maintained し て い る こ と を confirm で き た. に 2) の gimmick の sentaku sex を beg す 検 る た め, resisting ヒ ト IgG antibody immobilized ポ リ マ ー と CCVJ の presence で ウ サ ギ IgG mu (40-160 g/mL) を add し た. そ の results, antigen で あ る ヒ ト IgG mu (40-160 g/mL) を add し た occasions と different な り, intentionally な 蛍 light intensity の raised large は 観 measuring さ れ ず, this technique の sentaku sex が in stopping さ れ た. 従 っ て, this study で 発 し た antibody immobilized ポ リ マ ー と field sensitivity 蛍 light プ ロ ー ブ を using し た イ ム ノ ア ッ セ は イ method, new し い useful な イ ム ノ ア ッ セ イ method と し て expect で き る と exam え ら れ る.

项目成果

Design and development of a fluorescent probe for monitoring hydrogen peroxide using photoinduced electron transfer

• DOI: 10.1016/j.bmc.2004.11.023
• 发表时间: 2005-02-15
• 期刊: BIOORGANIC & MEDICINAL CHEMISTRY
• 影响因子: 3.5
• 作者: Soh, N;Sakawaki, O;Imato, T
• 通讯作者: Imato, T

A ratiometric fluorescent probe for imaging hydroxyl radicals in living cells

• DOI: 10.1039/b314204c
• 发表时间: 2004-03-07
• 期刊: CHEMICAL COMMUNICATIONS
• 影响因子: 4.9
• 作者: Soh, N;Makihara, K;Imato, T
• 通讯作者: Imato, T

Nobuaki Soh, Toshihiko Imato et al.: "Indirect competitive immunoassay for bisphenol A, based on a surface plasmon resonance sensor"Sensors and Materials. 15・8. 423-438 (2003)

Nobuaki Soh、Toshihiko Imato 等：“基于表面等离子体共振传感器的双酚 A 的间接竞争免疫测定”传感器和材料 15・8（2003）。

Nobuaki Soh, Toshihiko Imato et al.: "A surface plasmon resonance immunosensor for detecting a dioxin precursor using a gold binding polypeptide"Talanta. 60・4. 733-745 (2003)

Nobuaki Soh、Toshihiko Imato 等：“使用金结合多肽检测二恶英前体的表面等离子体共振免疫传感器”Talanta 60·4 (2003)。

Nobuaki Soh, Makoto Sonezaki, Toshihiko Imato: "Modification of a thin gold film with boronic acid membrane and its application to a saccharide sensor based on surface plasmon resonance"Electroanalysis. 15・15-16. 1281-1290 (2003)

Nobuaki Soh、Makoto Sonezaki、Toshihiko Imato：“硼酸膜的修饰及其在基于表面等离子体共振的糖传感器中的应用”15・15-16（2003）。