糖ヌクレオチド代謝異常が引き起こす細胞の悪性化機構の解析

糖核苷酸代谢异常引起的细胞恶变机制分析

• 批准号: 14760056
• 负责人: 藤田 憲一
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Osaka City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14760056/
• 关键词: マウス繊維芽細胞; UDP-sugar hydrolase; 糖ヌクレオチド分解酵素; 細胞間接着; balb; c 3T3

マウス繊維芽細胞balb/c 3T3(3T3)株は接着系の培養細胞で、コンフルエントまで増殖すると、増殖を停止する。一方、本細胞株をSV40ウィルスで形質転換した3T3SV株はマウスの皮膚へ移植すると腫瘍を形成する悪性細胞である。本3T3SV株は細胞間の接着が弱く、コンフルエントに達しても増殖を続ける。加えて、3T3SV株の膜画分においては他細胞の認識に深く関わっている細胞表層の糖鎖の前駆体である糖ヌクレオチドを分解するUDP-sugar hydrolase(USH)が異常亢進している。本研究ではUSHの異常亢進が細胞表層の糖鎖および細胞の増殖に与える影響を明らかにしようとしている。まず、USHの異常亢進が3T3株の増殖に与える影響について調べた。大腸菌K-12株より抽出したゲノムDNAよりPCR法によりUSHのORFを増幅し、ドキシサイクリン(DOX)制御下でUSH発現調節可能なプラスミドを作製した。次いで、これにより形質導入を行い、3ヶ月間培養を続け、安定化したクローンを得た後、薬剤耐性を指標として本発現系を有する株を約200株選択した。コンフルエントまで増殖したこれらの株をDOXで処理したところ、膜画分にUSHの異常亢進が見られる株が数株取得できた。さらに、USHの異常亢進が認められた株についてその増殖特性を調べた。DOXの有無で3日間培養したところ、意外なことに、それら株の増殖はDOXの添加によりやや抑えられていることがわかった。また、それら株の細胞表面の糖鎖をマンノースおよびグルコースを認識するレクチン、コンカナバリンA(Con A)によって標識したところ、DOXの有無によるCon Aとの結合に有意の差は認められなかった。DOXの添加による増殖阻害は細胞表面の糖鎖構造に依存するものではなく、USHの異常亢進による糖ヌクレオチドプールの消失に依存するものかもしれない。

The cell culture of Balb/c 3T3 (3T3) strain was conducted in vitro. The cell line SV40 was transformed into a tumor cell line SV3. This 3T3 SV strain has a weak intercellular connection and a rapid growth. In addition, UDP-sugar hydrolase(USH) was abnormally elevated in the membrane structure of 3T3 SV strain, which was deeply related to the recognition of other cells. This study is aimed to investigate the effects of USH on cell surface glycogen and cell proliferation. The abnormal hyperactivity of USH and 3T3 strains is affected by the abnormal growth of USH. E. coli K-12 strain was isolated from the genome of USH by PCR. The ORF of USH was amplified by PCR. The expression of USH was regulated by DOX. About 200 strains were selected from the plant after three months of cultivation, stabilization, and resistance index. The plants were treated with DOX, and the membrane was separated from USH. The plants were treated with DOX. In addition, USH's abnormal hyperactivity has been recognized as the growth characteristics of the plant. DOX is not available during the day. The sugar chain on the cell surface of the plant is identified by the presence or absence of DOX and the intentional difference between DOX and Con A. The growth inhibition of DOX is dependent on the carbohydrate structure on the cell surface, and the growth inhibition of USH is dependent on the carbohydrate structure on the cell surface