家禽卵黄膜ZPCタンパクの繊維形成及び精子レセプター活性の制御機構

家禽卵黄膜ZPC蛋白对纤维形成和精子受体活性的控制机制

• 批准号: 14760177
• 负责人: 笹浪 知宏
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Shizuoka University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14760177/
• 关键词: 卵外被; 卵黄膜; ZPC; ZP1; 繊維形成; 受精; ウズラ; 精子レセプター; 翻訳後修飾

ZPCは鳥類の卵黄膜を構成するタンパクのひとつで,輔乳類の透明帯のZPCと相同なタンパクである。家禽の卵黄膜の繊維形成機構と生理機能をあきらかにするために,ZPCの不溶化機構を調べ,以下の結果を得た。卵黄膜を[^3H]標識ZPCとインキュベートしたところ,不溶性画分に放射活性が検出され,さらに,この不溶性画分を泳動し,オートラジオグラフィーで検出したところZPCのバンドが検出された。つまりZPCは卵黄膜と接触すると,不溶性に変化し,卵黄膜に取り込まれることを見い出した。2.卵黄膜の可溶化物を転写膜に固定化し,[^3H]標識ZPCを用いたリガンドブロット法で検出したところ,内層のもうひとつの構成タンパクであるZP1と特異的に結合することを発見した。また,[^3H]標識ZPCと卵黄膜の可溶化物をインキュベートし,抗ZPC抗体を用いた免疫沈降法を行なったところ,抗ZPC抗体によりZP1がZPCと共沈することがわかった。以上の結果からZPCは卵黄膜のZP1との結合を介して内層に取り込まれ,不溶化することが判明した。3.ZP1の発現組織を同定するために,特異的プライマーを設計しRT-PCR法でスクリーニングしたところ,ZP1は肝臓で発現していることを発見した。ついで,遺伝子の塩基配列を決定し,特異的抗体を作成し,これらをプローブとして生合成機構を調べたところZP1は女性ホルモンによって合成を刺激されることを発見した。4.ZPCとZP1との結合特性を調べる実験を行なったところ,この結合は,イオン強度,pHによる影響を大きく受けることを見い出した。つまり,両タンパクはイオン結合により特異的に結合することが判明した。

ZPC is composed of yolk membrane of birds, and ZPC is composed of transparent zone of auxiliary milk. Poultry yolk membrane formation mechanism and physiological function,ZPC insolubilization mechanism, the following results were obtained The yolk membrane [^3H] identifies ZPC and its insoluble components, and the radioactivity is detected. ZPC is not soluble in vitelline membrane, but soluble in vitelline membrane. 2. The soluble substance of yolk membrane is immobilized on the membrane, and [^3H] identification of ZPC is detected by the middle layer method, and the inner layer is composed of ZP1 specific binding. ZPC is identified as a soluble substance in the yolk membrane by immunoprecipitation assay for anti-ZPC antibodies. The above results show that ZPC is not soluble in ZP1. 3. The development of ZP1 was determined by RT-PCR and the development of ZP1 was observed. In the middle of the day, the gene base alignment is determined, and specific antibodies are produced. The synthesis mechanism of the gene is regulated. ZP1 is stimulated by the synthesis of the gene. 4. ZPC and ZP1 have different binding properties. For example, if you want to combine with a specific combination, you can identify it.

项目成果

Pan, J.: "Stimulation of ZPC production by follicle-stimulating hormone in the granulosa cells of Japanese quail (Coturnix japonica)."Journal of Poultry Science. 40・3. 202-211 (2003)

Pan, J.：“日本鹌鹑（Coturnix japonica）颗粒细胞中卵泡刺激素的刺激。” 家禽科学杂志 40・3（2003 年）。

Sasanami, T.: "Carboxy-terminal proteolytic processing at a consensus furin cleavage site is a prerequisite event for quail ZPC secretion"Biology of Reproduction. (受理・印刷中). (2003)

Sasanami, T.：“共有弗林蛋白酶切割位点的羧基末端蛋白水解加工是鹌鹑 ZPC 分泌的先决条件”《生殖生物学》（已接受并正在出版）。

Sasanami, T.: "Asparagine-linked oligosaccharide-independent secretion of egg envelope glycoprotein ZPC of the Japanese quail (Coturnix japonica)."Comparative Biochemistry and Physiology, Part A. 134・3. 631-638 (2003)

Sasanami，T.：“日本鹌鹑（Coturnix japonica）卵膜糖蛋白 ZPC 的天冬酰胺连接寡糖独立分泌。”比较生物化学和生理学，A 部分 134・3（2003 年）。

森 誠: "受精における卵黄膜の役割"日本家禽学会誌. 39(J2). J121-J129 (2002)

Makoto Mori：“卵黄膜在受精中的作用”日本家禽学会杂志 39（J2）（2002）。

Sasanami, T.: "Expression of perivitelline membrane glycoprotein ZP1 in the liver of Japanese quail (Coturnix japonica) after in vivo treatment with diethylstilbestrol."Journal of Steroid Biochemistry & Molecular Biology. 84・1. 109-116 (2003)

Sasanami, T.：“用己烯雌酚进行体内处理后，卵黄周膜糖蛋白 ZP1 在日本鹌鹑 (Coturnix japonica) 肝脏中的表达。”类固醇生物化学与分子生物学杂志 84·1 (2003)。