ヒト皮膚結合織型肥満細胞大量純粋培養系をモデルとした肥満細胞増殖機構の解明

以人体皮肤结缔组织肥大细胞大规模纯培养体系为模型阐明肥大细胞增殖机制

• 批准号: 14770405
• 负责人: 神戸 直智
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14770405/
• 关键词: 肥満細胞; CD13; aminopeptidase N; 細胞増殖; 免疫不全マウス

私はこれまでに,成熟した肥満細胞をヒト皮膚から単離しstem cell factor (SCF)を含有する無血清培地で培養することで,従来は増殖能を有さないと考えられてきたヒト肥満細胞が,皮膚結合織型肥満細胞としての形質を保持したまま増殖することを明らかにした。本研究では,このヒト肥満細胞の増殖メカニズムについて,肥満細胞上に発現するCD13に注目して解析を行った。1:皮膚由来ヒト肥満細胞の培養を行い,ヒト結合織型としての形質を保持していることを確認した。2:HMC-1や臍帯血由来ヒト培養肥満細胞,皮膚由来結合織型ヒト培養肥満細胞が細胞表面にCD13を発現することを確認した。3:CD13自体がaminopeptidase Nという酵素であることを利用して、各種培養肥満細胞に発現するCD13の活性をLeu-pNAの分解能を指標として確認した。4:aminopeptidase Nの特異的酵素阻害剤であるactinoninあるいは対照としてaminopeptidase Bの阻害剤であるarphamenine Bを添加し,CD13活性が抑制されるか,さらに実際に各種培養肥満細胞の増殖が抑制されるかを検討し,CD13の抑制により増殖が減少するものの,aminopeptidase Bの阻害では増殖に影響を受けないことを確認した。5:さらにヒト肥満細胞の増殖機構を明らかとするために,免疫不全マウス生体内においてヒト肥満細胞の増殖を誘導する系の樹立に着手し,ヒト臍帯血中に含まれる造血幹細胞から結合織型肥満細胞を含め,マウス生体内においてヒト肥満細胞が分化することを確認した。

The mature cells were cultured in serum-free medium containing SCF (stem cell factor), and the growth potential of the mature cells was maintained in medium containing SCF (stem cell factor). In this study, we focused on the analysis of CD13 in the proliferation and development of these cells. 1: The origin of skin fat cells cultured in the process, the combination of tissue type and quality to maintain the process of confirmation. 2:HMC-1 and umbilical cord blood derived from cultured fat cells, skin derived from combined tissue type cultured fat cells, CD13 expression on cell surface was confirmed. 3. CD13 activity and Leu-pNA degradation activity were determined by using CD13 native aminopeptidase N and enzyme, and expressing CD13 in various cultured cells. 4:Aminopeptidase N's specific enzyme inhibitor, actinonin, is in contrast to aminopeptidase B's inhibitor, arphamenine B is added, and CD13 activity is inhibited. In addition, the proliferation of various cultured fertilizer cells is inhibited. When we examine the inhibition of CD13, the proliferation is reduced, and it is confirmed that the inhibition of aminopeptidase B has no effect on proliferation. 5. The development of hematopoietic stem cells in the umbilical cord blood was confirmed by the identification of the development mechanism of hematopoietic stem cells in vivo.

项目成果

神戸直智, 宮地良樹: "ヒト肥満細胞の増殖に対するトシル酸スプラタストの効果"西日本皮膚科. 64(4). 494-495 (2002)

Naotomo Kobe，Yoshiki Miyaji：“suplatast 甲苯磺酸盐对人类肥大细胞增殖的影响”West Japan Dermatology 64(4) 494-495 (2002)。

神戸直智, 宮地良樹: "結合織型ヒト培養肥満細胞からのヒスタミン遊離におよぼすフマル酸エメダスチンの効果"アレルギー・免疫. 9(8). 909-914 (2002)

Naotomo Kobe，Yoshiki Miyaji：“富马酸依美斯汀对培养的结缔组织肥大细胞释放组胺的影响”过敏和免疫学 9(8) (2002)。

Kambe N., Miyachi Y.: "A possible mechanism of mast cell proliferation in mastrocytosis"J Dermatol. 29(1). 1-9 (2002)

Kambe N.，Miyachi Y.：“肥大细胞增多症中肥大细胞增殖的可能机制”J Dermatol。

Kambe N, Hiramatsu H, Shimonaka M, et al.: "Development of both human connective tissue-type and mucosal-type mast cells in mice from hematopoietic stem cells with identical distribution pattern to human body."Blood. 103. 860-867 (2004)

Kambe N、Hiramatsu H、Shimonaka M 等人：“在小鼠体内从造血干细胞发育出人类结缔组织型和粘膜型肥大细胞，其分布模式与人体相同。”血液。

Moon TC, Lee E, Baek SH, et al.: "Degranulation and cytokine expression in human cord blood-derived mast cells cultured in serum-free medium with recombinant human stem cell factor"Mol Cells. 16. 154-160 (2003)

Moon TC、Lee E、Baek SH 等人：“在含有重组人干细胞因子的无血清培养基中培养的人脐带血来源的肥大细胞中的脱颗粒和细胞因子表达”Mol Cells。