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Regulatory Mechanisms of Granulomatous Inflammation Focusing on Post-translational Modifications

以翻译后修饰为重点的肉芽肿性炎症调节机制

基本信息

批准号：
22K08380
负责人：
神戸直智
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08380/
关键词：
肉芽腫自己炎症ブラウ症候群翻訳後修飾ユビキチン化 NOD2

项目摘要

感染症のみならず，変性した自己や代謝産物に対しても形成される免疫反応である肉芽腫のメカニズムには不明点が多い。我々は，細胞内パターン認識受容体であるNOD2遺伝子に変異を有することで自己炎症的機序により，皮膚と関節，眼に肉芽腫をきたすブラウ症候群の解析に従事してきた経験から，このブラウ症候群をモデル疾患として捉えた肉芽腫のメカニズム解明に取り組んでいる。リン酸化以外の翻訳後修飾として近年蛋白の精度管理を超えて注目されるユビキチン化に着目した本研究においては，まずブラウ症候群から同定されるNOD2変異体の病的意義を評価するために，我々はFLAG標識をしたNOD2をHEK293細胞へと遺伝子導入し，ルシフェラーゼ活性を指標にNF-κBの転写亢進能を評価してきた実験系を用いて，ここにHA標識をしたユビキチンを同時に遺伝子導入することで，変異NOD2によって誘導されるユビキチン鎖の同定を試みた。この際，NLR分子の活性化にはK63が関わると推定されることから，HA標識をしたWTユビキチン，K63のみを残し他の残基をアルギニンに置換したユビキチン（Ub-K63），コントロールとしてUb-K48など他のLys残基を１つずつ残したものを遺伝子導入系に導入し，抗HA抗体を用いてユビキチン鎖の形成の有無を確認したが，残念ながらNOD2の変異の有無，およびNOD2のリガンドであるMDPの有無によって形成されるユビキチン鎖に変化は見られなかった。さらに，NOD2の下流でシグナル伝達に関わることが同定されているRIPK2を標的蛋白として，RIPK2の関わるユビキチン形成についても検討したが，この際もNOD2変異の有無による差異は確認できていない。

The infection is characterized by a variety of metabolic products and immune responses. The mechanism of inflammation in the skin, joints, and eyes granuloma is analyzed in detail. The mechanism of inflammation in the skin, joints, and eyes granuloma is analyzed in detail. In this study, we evaluated the role of FLAG markers in NOD2, HEK293, gene transfer, and NF-κB hyperactivity as indicators of protein precision management. The HA logo is displayed on the same page as the NOD2 logo. At this time, the activation of NLR molecule was estimated to be related to K63, HA identification was determined to be WT, K63 residues were replaced by other residues (Ub-K63), K63 residues were replaced by other residues (Ub-K48 residues), and the introduction of anti-HA antibody was confirmed to be related to the formation of anti-HA antibody. NOD2 is different from NOD2. MDP is different from NOD2. In addition, NOD2 and its downstream proteins are related to the identification of RIPK2 target proteins, and RIPK2 and its related protein formation are related to the identification of NOD2 and their differences.