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インフラマソームの構成成分が関わる細胞死の人為的制御系の確立とそのメカニズム解明

涉及炎症小体成分的细胞死亡人工控制系统的建立及其机制的阐明

基本信息

批准号：
22659203
负责人：
神戸直智
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Chiba University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2010
资助国家：
日本
起止时间：
2010 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22659203/
关键词：
皮膚科学炎症 IL-1β NLRP3 インフラマソーム細胞死カテプシン阻害剤

项目摘要

NLR遺伝子のホモログである植物の耐病遺伝子は,感染を許した細胞自身が細胞死に陥るとともに,炎症を惹起することで病原微生物の脅威に対抗している。NLR遺伝子の1つであり,家族性寒冷蕁麻疹の原因遺伝子であるNLRP3の活性化によっても,インフラマソームを介したIL-1βの活性化によって誘導される炎症に加えて,アポトーシスとは異なる経路でネクローシス様のプログラム細胞死が誘導される。しかし,その実態はカテプシン阻害剤として知られるCA074Meによって抑制されること以外は分かっていない。本研究では。NLR疾患変異遺伝子の発現と誘導される細胞死を人為的に制御できる系を確立するため,NLRP3の疾患関連変異体および野生型を,標識のためのGFPとのキメラ蛋白として作成し,発現を人為的に制御するためにテトラサイクリン誘導系として構築した。これをウイルス上清を用いてマウス肥満細胞株に導入し,安定発現株を樹立した。野生型NLRP3を導入した細胞は,ドキシサイクリン(Dox)添加によりGFPの発現が誘導された。疾患関連変異体を導入した細胞では,Dox添加によりネクローシス様の細胞死が誘導され,その細胞死はCA074Meの添加により抑制された。この様に,人為的にNLRP3の発現を誘導し,それに伴って目的とするネクローシス様の細胞死を誘導する細胞を樹立することができた。引き続き,この樹立した細胞を用いて検討を加えることで,NLRP3の活性化によって誘導されるネクローシス様の細胞死の分子機序を明らかにしていく。

NLR genes are responsible for the resistance of plants to infection, cell death, inflammation, and the threat of pathogenic microorganisms. The activation of NLRP3 is mediated by the activation of IL-1β, which induces inflammation, and the activation of NLRP3 is induced by the activation of IL-1β, which induces cell death. CA074 Me is the only one who can control the situation. This study is. NLR disease-related variants and wild-type variants of NLRP3 were identified by GFP protein production and induction of NLR disease-related variants, and artificial control of NLR disease-related variants was established. The cell line was introduced into the cell line and the stable cell line was established. Wild-type NLRP3 was introduced into the cells and GFP expression was induced by addition of Dox. Disease-related allogeneic introduction into the cells,Dox addition induced cell death, and CA074Me addition inhibited cell death. In this way, the artificially induced discovery of NLRP3 can also lead to the establishment of cells that are accompanied by purpose-like cell death. The molecular mechanism of cell death induced by NLRP3 activation is clearly identified.