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転写因子Oct-3/4と相互作用する新規コファクターの探索ならびに機能解析

与转录因子 Oct-3/4 相互作用的新型辅助因子的搜索和功能分析

基本信息

批准号：
14780534
负责人：
升井伸治
金额：
$ 1.86万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-14780534/
关键词：
ES細胞 Oct-3 4 転写因子分化 TAP NEDD4 ROSA26 テトラサイクリン GATA-6 栄養外胚葉胚体外内胚葉

项目摘要

マウスES細胞における未分化状態維持に必須の因子として転写因子Oct-3/4が知られており、本研究は新規Oct-3/4コファクターの単離を狙ったものである。現在までに、改変型免疫沈降法の開発に成功しており、これによってOct-3/4と相互作用するとみられるタンパク質を数種類同定している。その中には、E3ユビキチンライゲースであるNEDD4も含まれていた。NEDD4は様々な膜タンパク質の量を調節しており、神経初期発生に重要な役割を果たしていると考えられているが、ノックアウトマウスの報告は無く、その機能には未知の部分が多い。興味深いことに、NEDD4の発現はES細胞の分化に伴って低下することを最近見出している。一方、ゲル上のバンドとしては検出できるものの、量的問題のためにマス解析にて同定できない共沈降タンパク質も多数確認している。今後はこの改変免疫沈降法をさらに大規模に行い、Oct-3/4と相互作用するタンパク質を網羅的に同定するヒとを予定している。またNEDD4を含め得られた候補タンパク質の遺伝子を、ES細胞において強制発現または誘導的ノックアウト実験を行い、未分化状態維持機構への関与を検証していきたい。多種類の遺伝子の機能解析を迅速に行うためのシステムとして、交換可能なテトラサイクリン制御性発現ユニットをROSA26遺伝子座へ導入し、簡便且つ確実に望みのcDNAの発現をテトラサイクリンで制御できるシステムの構築に成功している。(すでに多方面の研究者に配布済みである)。他方、未分化マーカー遺伝子Rex-1のノックアウト実験を行って、この遺伝子産物はマウス発生過程において必要ではないことを証明した(升井ら、第36回発生生物学会年会2003年)。

The factors necessary to maintain the undifferentiated state of ES cells are Oct-3/4, which is a new rule in this study. Now, the modified immunosedimentation method has been successfully developed, and the number of different kinds of immunosedimentation methods has been determined. E3 NEDD 4 has a lot of unknown parts in the report of the initial development of the brain, such as the quality of the membrane, the quality of the membrane and the quality of the membrane. The development of NEDD 4 and ES cell differentiation have recently been reported. The problem of quantity and quantity is solved by analyzing the problem of quantity and quantity, and the problem of quality is confirmed by analyzing the problem of quantity and quantity. In the future, the immune sedimentation method will be used to determine the identity of the tumor. NEDD 4 contains candidate genes, ES cells, stress generation, induction, undifferentiated state maintenance mechanisms, and identification. The functional analysis of multi-species cDNA can be performed rapidly and efficiently, and the construction of control system can be successfully carried out by introducing ROSA 26 cDNA loci into ROSA 26. (This is a multi-disciplinary approach for researchers.) Other, undifferentiated gene Rex-1 is proved to be necessary for its development (Hoi, 36th Annual Meeting of the Society for Biological Evolution, 2003).