ゼブラフィッシュを用いたダイオキシン発生毒性発現機序の分子生物学的研究

利用斑马鱼研究二恶英发育毒性机制的分子生物学

• 批准号: 03F00126
• 负责人: 平賀 武夫
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Rakuno Gakuen University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03F00126/
• 关键词: ダイオキシン; Shh; ゼブラフィッシュ; 毒性; モルフォリノ; Twhh; 下顎; AhR2

1.ダイオキシン(TCDD)暴露による下顎の遺伝子発現への影響(1)shhが48hpfから神経底板や、上顎と下顎の上皮に発現がみられた。その他のヘッジホッグであるtwhhはshhと非常に類似した発現パターンを示すことが神経底板、中脳後脳境界領域のほか、今回下顎でもわかった。これに対し、1ppb暴露群ではshhとtwhh発現の低下が見られた。(2)Shhの受容体であるptc1、ptc2はともに神経底板や中脳後脳境界領域の他、下顎においてshhの近傍の上皮と間充織に発現が確認できた。さらにヘッジホッグ下流の転写因子であるgli1とgli2は下顎の原基、および神経底板で発現が観察されたが、gli3は下顎での発現はみられなかった。これに対して、以上の遺伝子がTCDDによる影響がみられなかった。(3)線維芽細胞成長因子fgf8は下顎の先端部分と中脳後脳境界領域にその発現がみられたが、TCDD処置による影響はみられなかった。2.TCDD毒性におけるAhR2の役割(1)TCDD暴露により下顎におけるcyp1AmRNAの誘導が観察された。(2)モルフォリノアンチセンスオリゴヌクレオチド(AhR2-MO)によりcyp1A誘導が転写レベルで抑えられることが確認された。(3)生体観察によりTCDDの作用に対するAhR2-MOの影響を72hpfの下顎において、TCDD 1ppb暴露による下顎の低形成を回復したことを観察した。3.下顎伸張に対するヘッジホッグ修飾の影響(1)sonic you(syu)と呼ばれるミュータントはshhに点突然変異を持ち、顕著な下顎の低形成を示した。(2)下顎成長はShh阻害剤であるcyclopaminの濃度に依存し、有意な抑制が観察された。

1. ダ イ オ キ シ ン (TCDD) exposed に よ る jaw の heritage 伝 son 発 now へ の effects (1) SHH が 48 HPF か ら god 経 backplane や, upper jaw jaw の と epithelial に 発 now が み ら れ た. そ の he の ヘ ッ ジ ホ ッ グ で あ る TWHH は SHH と very similar し に た 発 now パ タ ー ン を shown す こ と が 経 motherboard, god 脳 脳 boundary areas after の ほ か, today back to chin で も わ か っ た. <s:1> れに shows a low performance of で, で, shh, と, and twhh against で and 1ppb exposure groups が see られた. (2) Shh の is let body で あ る ptc1, ptc2 は と も に 経 floor や god 脳 の 脳 state field after him, and jaw に お い て Shh の nearly alongside の between epithelial と filling knit に 発 が now confirmed で き た. さ ら に ヘ ッ ジ ホ ッ グ obscene の planning write factor で あ る gli1 と gli2 は jaw の primordium, お よ び god 経 backplane で 発 now が 観 examine さ れ た が, gli3 は jaw で の 発 now は み ら れ な か っ た. The influence of がみられな れに on て and the above-mentioned cultural heritage 伝 がTCDDによる is がみられな がみられな った った. (3) d bud cell growth factor fgf8 は jaw の apex in partial と 脳 脳 boundary areas after に そ の 発 now が み ら れ た が, TCDD 処 buy に よ る influence は み ら れ な か っ た. 2. The toxicity of TCDD に お け る the AhR2 cut (1) the TCDD の service exposure に よ り jaw に お け る cyp1AmRNA の induced が 観 examine さ れ た. (2) モ ル フ ォ リ ノ ア ン チ セ ン ス オ リ ゴ ヌ ク レ オ チ ド (the AhR2 - MO) に よ り cyp1A induced が planning write レ ベ ル で え suppression ら れ る こ と が confirm さ れ た. (3) the raw body 観 examine に よ り TCDD の role に す seaborne る the AhR2 -mo の を 72 HPF の jaw に お い て, 1 PPB TCDD exposed に よ る low jaw の reply form を し た こ と を 観 examine し た. 3. The jaw stretching に す seaborne る ヘ ッ ジ ホ ッ グ modified の effect (1) the sonic you (syu) と shout ば れ る ミ ュ ー タ ン ト は SHH に point - different を hold ち, suddenly 顕 な chin の low formation を し た. (2) The lower jaw growth <s:1> Shh inhibitor であるcyclopamin <s:1> concentration に is responsible for <s:1> and intentionally な inhibition が観 observation された.

项目成果

Teraoka, H.et al.: "Induction of cytochrome P450 1A is required for circulation failure and edema by 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin in zebrafish."Biochemical and Biophysical Research Communications. 304・2. 223-228 (2003)

Teraoka, H. 等人：“斑马鱼的循环障碍和水肿需要细胞色素 P450 1A 的诱导。”生物化学和生物物理研究通讯 304・2。 -228 (2003)

Teraoka, H.et al.: "Zebrafish as a novel experimental model for developmental toxicology."Congenital Anomalies, Kyoto. 43・2. 123-132 (2003)

Teraoka, H.et al.：“斑马鱼作为发育毒理学的新型实验模型。”先天性异常，京都 43・2 (2003)。

Dong, W.et al.: "Role of aryl hydrocarbon receptor in mesencephalic circulation failure and apoptosis in zebrafish embryos exposed to 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin."Toxicological Sciences. 77・1. 109-116 (2004)

Dong, W. 等人：“芳基烃受体在暴露于 2,3,7,8-四氯二苯并-对二恶英的斑马鱼胚胎中的中脑循环衰竭和细胞凋亡中的作用”。毒理学科学 77・1。 (2004)

Prasch, A.L.et al.: "Aryl hydrocarbon receptor 2 mediates 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin developmental toxicity in zebrafish."Toxicological Sciences. 76・1. 138-150 (2003)

Prasch, A.L. 等人：“芳基碳氢化合物受体 2 介导斑马鱼的 2,3,7,8-四氯二苯并-对二恶英发育毒性。”毒理学科学 76・1 (2003)。

Teraoka, H. et al.: "Role of cytochrome P450 in circulation failure and edema by 2,3,7,8-tetra-chlorodibenzo-p-dioxin in zebrafish."The Journal of Toxicological Sciences. 28・4. 313 (2003)

Teraoka, H. 等人：“细胞色素 P450 在 2,3,7,8-四氯二苯并-对二恶英引起的斑马鱼循环衰竭和水肿中的作用。”毒理学杂志 28・4。 2003）