コオロギ色素拡散ホルモン様ペプチドの日周期的発現の分子生物学的解析

蟋蟀色素扩散激素样肽昼夜节律表达的分子生物学分析

• 批准号: 03F00320
• 负责人: 富岡 憲治
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03F00320/
• 关键词: 色素拡散ホルモン様ペプチド; PDF; 概日時計; 概日リズム; コオロギ; 神経系; 視葉; 日周性

色素拡散ホルモン様ペプチド(PDF)は昆虫の脳内に広く分布する神経ペプチドであり、概日時計機構に関与することが示唆されている。本研究では、PDFの時計機構への関与を明らかにする第一歩として、1)PDF蛋白質とmRNAの発現の日周リズム、2)PDFの核移行のタイミング、3)PDF発現と核移行のタイミングへの5'-UTRと3'-UTRの関与、の3点を明らかにすることを目的としている。本年度は、1)PDF発現の日周性の検討、および2)pdf mRNA発現の日周性の検討を計画した。まず、単一視葉内でのPDF発現の日周リズムを検討するため、PDFを定量する競合的ELISA法を確立した。脳視葉内からのPDFの抽出については、アセトン、酢酸、エタノール等での抽出を試みた結果、4%酢酸での抽出が最も適していることがわかった。そこで、この手法により、明暗周期下で各時間ごとに視葉から抽出したサンプルを用いて、視葉内PDFの日周変動を解析したところ、明期に少なく暗期に増加する周期的な発現が見られた。明期の中ほどで単一視葉内のPDFは約200fmolであり、暗期の中ほどでピークを示しそのときの含有量は約680fmolであった。したがって,昼夜変動は約3.4倍と見積もられた。現在、恒暗条件下でサンプルを行い、PDF量の概日変動を検討しているところである。Pdf mRNA発現の日周性については、現在in situハイブリダイゼーションを行うためのプローブの設計を行っている。

The distribution of pigments in insects (PDF) is known to be instigated by computer, computer and computer. In this study, the PDF timing agency registered and verified that the first round of the test, 1) PDF protein mRNA test, 2) PDF nuclear transfer cycle, 3) PDF nuclear transfer cycle, 3) PDF transfer cycle, 3) 5'-UTR cycle This year, 1) PDF has a daily schedule, and 2) pdf mRNA has seen a daily program. In this paper, the ELISA method for the determination of daily and weekly PDF data and PDF quantitative analysis is established. Monitor the results of the PDF extraction test results, and 4% of the sorrel extraction is the most effective. In the light and dark cycle, every time in the light and shade cycle, every time in the light and dark cycle, in the light and dark periods, in the light and dark periods. In the future, we will pay attention to the PDF in the 200fmol market, while in the dark period, we will show that the content is about 680fmol. The daily activity is about 3.4 times as much as that of the day and night. At present, under constant dark conditions, the volume of PDF and the volume of PDF will be available on a daily basis. Pdf mRNA is now running on a daily basis, and now it is on a daily basis. It is now available to in situ users.