転写伸長反応における制御機構の研究

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転写反応は開始・伸長・終結の三段階に分類されている.私の研究対象であるNELFという転写因子は当研究室で精製・同定された新規の転写伸長因子であり、試験管内では転写伸長を負に制御する事が分かっている.しかし、NELFの細胞内における転写伸長制御機構に関してはまだ明らかにされていない.当研究室ではNELFが細胞周期の細胞分裂期(M期)、及びDNAダメージを受けた時にリン酸化されるデタが得ている.従って、私はNELFが細胞周期(特にM期)、及びDNAダメージによる転写伸長反応の制御機構に関わっていると推測し、この関係の解明を目的とした.NELFの細胞内機能に関しては下記の方針を用いて解析を進めている.1,NELFの細胞内局在の解析蛍光タンパク質EYFPを付加したNELFを恒常的に発現するHeLa細胞株を樹立した.蛍光顕微鏡法を用いてこの細胞株の解析を行った結果,NELFは細胞周期、及びDNAダメージによって核内における局在が変化する事を明らかにした.そこで現在、この変化がNELFのリン酸化によるものだと考え、生化学的手法を用いて解析を行っている.2,NELFの細胞内相互作用因子の同定恒常的にFlag-tagNELF融合タンパク質を発現するHeLa細胞株を樹立した.この細胞株からM期の細胞、及びDNAダメージを受けた細胞の核抽出液を取り、抗Flag免疫沈降法を用いてNELFに相互作用する因子を精製した.今後、精製されたタンパク質の同定を質量分析計を用いて行う.3.NELFの発現量を減少させた細胞(ノックダウン細胞)の解析RNAi法を用いてNELFノックダウンHeLa細胞株を樹立した一今後、NELFノックダウン細胞の細胞周期、DNAダメージ感受性、及び遺伝子発現プロファイルの解析を行う.