転写伸長反応における制御機構の研究

转录延伸反应控制机制研究

• 批准号: 03F03758
• 负责人: 半田 宏
• 金额: $ 0.77万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03F03758/
• 关键词: 転写伸長反応; Negative Elongation Factor(NELF); 細胞周期; 蛍光顕微鏡法; 細胞内局在; RNA干渉法; 免疫沈降法; 質量分析計

本研究の目的は、mRNAの合成をつかさどるRNAポリメラーゼIIによる転写伸長反応の制御機構の解析である。私の研究対象であるNELFという転写伸長因子は当研究室で精製・同定された新たな因子であり、試験管内では転写伸長を負に制御する事が分かっている.しかし、NELFの細胞内機能に関してはまだ明らかにされていないため、NELFの細胞内機能解析を下記の方針で行なった.1,NELFの細胞内局在蛍光タンパク質EYFPを付加したNELFを恒常的に発現するHeLa細胞株を樹立し、蛍光顕微鏡法を用いてこの細胞株の解析を行った結果、NELFの局在は脊髄性筋萎縮症という難病の原因となる因子SMN共局在している事が明らかになった.これは、NELFが脊髄生筋萎縮症に関わっている事を示唆している.2,NELFの細胞内相互作用因子群SMNをNELFの相互作用因子の一つとして検討するため、Flagタグを付加したNELFを発現するHeLa細胞株を樹立し、その細胞抽出液から抗Flag免疫沈降法を用いてNELFに相互作用する因子群を精製した.予測通りこれら因子の中にSMNは含まれていた.現在、精製された他の因子を質量分析計用いて同定している.3,NELFノックダウン細胞NELFの機能の一つとしてSMNの細胞内局在を制御する事が考えられる.従って、RNA干渉法を用いてNELFをノックダウンした上で、SMNの局在を解析した.しかしSMNの局在に顕著な変化は観察されなかった.これら結果から、NELFはSMNと相互作用するが、その機能はSMNの細胞内局在の制御ではないという事を明らかにした.今後はNELFとSMN、および他のNELF相互作用因子との関係を分子レベルで解析し、論文の作成・投稿に移る.

は の purpose, this study mRNA の synthetic を つ か さ ど る RNA ポ リ メ ラ ー ゼ II に よ る planning write elongation anti 応 の system royal institution の parsing で あ る. Private の research like で seaborne あ る NELF と い う planning writing は elongation factors when laboratory で refined, with fixed さ れ た new た な factor で あ り, test tube で は planning write elongation を negative に suppression す る matter が points か っ て い る. し か し, NELF の cell function に masato し て は ま だ Ming ら か に さ れ て い な い た め, NELF の function in the cell under the analytic を to remember の policy line で な っ た. 1, NELF の bureau in cells in 蛍 light タ ン パ ク qualitative EYFP を plus し た NELF を constant に 発 now す る HeLa cell line を し, 蛍 light 顕 を micro mirror method with い て こ の cell lines line analytical を の っ た results, NELF の bureau in は spinal marrow sex muscle atrophy と い う difficult diseases の と な る factor SMN total bureau In し て い る matter が Ming ら か に な っ た. こ れ は, NELF が spinal marrow raw muscle atrophy に masato わ っ て い を る things in business し て い る. 2, NELF の interaction factor in the cell group of SMN を NELF の interaction factor の つ と し て beg す 検 る た め, Flag タ グ を plus し た NELF を 発 now す る HeLa cell line を Establish <s:1>, そ, <s:1> cell extract, ら, anti-flag immunoprecipitation method, を, and refine た with <s:1> てNELFに interaction する factor group を. Be tong り こ れ ら factor in の に SMN は containing ま れ て い た. Now, the refined さ れ た he の factor を quality analyzer with い て with fixed し て い る. 3, NELF ノ ッ ク ダ ウ ン cells NELF の function の a つ と し て SMN bureau in を の cell suppression す る matter が exam え ら れ る. 従 っ て, RNA を dry involved method with い て NELF を ノ ッ ク ダ ウ ン し た で, SMN の bureau in analytical し を た. し か し SMN の bureau in に 顕 the な variations change は 観 examine さ れ な か っ た. こ れ ら results か ら, NELF は SMN と interaction す る が, そ の function は SMN bureau in の の cell suppression で は な い と い を Ming ら う thing Youdaoplaceholder0 に た. Future は NELF と SMN, お よ び he の NELF interaction factor と の masato is を molecular レ ベ ル で parsing し contribute, paper の · に る.