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スフィンゴ糖脂質糖鎖による生体調節の分子機構

鞘糖脂糖链生物调节的分子机制

基本信息

批准号：
03J00958
负责人：
奥田徹哉
金额：
$ 1.73万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

1、グロボ系糖脂質の生理学的機能と疾患との関連についての解析。グロボ系糖脂質は様々な糖脂質の基質となるラクトシルセラミドにα1,4結合でガラクトースが結合したGb3を開始構造として伸長する糖脂質であり、特にGb3が病原性大腸菌O157の産生毒素であるベロ毒素の受容体となることが知られている。グロボ系糖脂質本来の機能と疾患との関連について明らかにするため、Gb3の合成酵素遺伝子であるα1,4-galactosyltransferase遺伝子のKOマウスを、相同組換えに基づくジーンターゲッティング法により作成した。このKOマウスでは、組織のグロボ系糖脂質の発現が予想通り完全に消失しており、目指したグロボ系糖脂質欠損マウスを確立した。次に、in vivoにおけるベロ毒素受容としてのGb3の役割について検討するため、KOマウスのベロ毒素に対する反応性について、静脈よりベロ毒素を投与した後の症状や組織の傷害について野生型マウスと比較検討した。その結果、このKOマウスは野生型マウスの致死量より100倍量のベロ毒素を投与しても異常症状なく生存し、また病理学的な検討においても、組織の異常を全く認めなかったことから、in vivoにおけるベロ毒素の毒性が、Gb3の発現に完全に依存することが明かとなった。さらに、主要な傷害組織である大脳皮質、近位尿細管において、一部の血管内皮細胞がGb3を発現することを免疫組織染色により明らかにし、これをターゲットとしてベロ毒素が作用することが組織傷害の起因となることを明らかにした。2、小脳神経細胞における複合型ガングリオシドの機能解析。複合型ガングリオシド欠損マウス(β1,4GalNAc-T KOマウス)では、野生型マウスと比較して早期からの小脳のPurkinje細胞層の変性が認められる。そこで、このKOマウスを用いた小脳神経細胞初代培養系および組織培養系を構築し、培養下での細胞の生存、分化、またガングリオシドの変化を、KOとコントロールで比較検討した。その結果、KOマウス由来のPurkinje細胞は、初代培養下において生存率が低下することを明らかにした。また、9-0-アセチル化されたガングリオシドの過剰な発現が起ることを明らかにした。

The main results are as follows: 1. The physiological mechanism of glycolipid is the analysis of diseases and diseases. This is the system of glycolipid chain reaction, glycolipid chain reaction, glycolipid enzyme, glycolipid, glycolipid, glycolipid Glycolipid was used to treat diseases, diseases, For example, the KO system, the organization system, the glycolipid, the glycolipid, the glycolipid. The second, in vivo, in vivo, toxin tolerance, Gb3, KO, anti-toxin, anti-toxin and anti-toxin. The results showed that the lethal dose of wild type virus was 100 times higher than that of wild type virus, the lethal dose of KO toxin was 100 times higher than that of wild type virus, the lethal dose was 100 times higher than that of wild type virus, the lethal dose was 100 times higher than that of wild type virus, the lethal dose of wild type virus was 100 times higher than that of wild type virus, the lethal dose of wild type virus was 100 times higher than that of wild type virus, the lethal dose of wild type virus was 100 times higher than that of wild type virus, the lethal dose of wild type virus was 100 times higher than that of wild type virus, the lethal dose of wild type virus was 100 times higher than that of wild type virus, the lethal dose of wild type virus was 100 times higher than that of wild type virus, the lethal dose of wild type virus was 100 times higher than that of wild type virus, the lethal dose of wild type virus was 100 times higher than that of wild The skin, proximal urinary tract, Gb3 and immunostaining of vascular endothelial cells were detected by immunostaining and immunostaining. The effects of toxins on tissue damage were analyzed. 2. It is possible to analyze the mechanism of the complex model of the cell. The clones of the replicative type and the wild type were less than those of the wild type, while those of the wild type were smaller than those of the early stage. The cells of the wild type were less than those of the wild type, and the cells of the wild type were less than those of the wild type. The cells of the wild type were much smaller than those of the wild type, and that of the wild type was lower than that of the wild type. The cells were cultured in the primary culture of the cell culture system. The cells were cultured to survive, differentiate, and differentiate. The cells were cultured and cultured. The results of KO test, the origin of Purkinje cell, the lower survival rate of primary culture, the lower survival rate, and the lower survival rate of primary culture. No, no.