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生殖腺の形成に不可欠な転写因子の翻訳後修飾による活性調節機構の解析

性腺形成必需转录因子翻译后修饰的活性调节机制分析

基本信息

批准号：
03J06584
负责人：
小松朋子
金额：
$ 1.15万
依托单位：
The Graduate University for Advanced Studies
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J06584/
关键词：
転写因子転写調節翻訳後修飾 Ad4BP SF-1 SUMO化

项目摘要

Ad4BP/SF-1は、生殖腺と副腎の形成に必須な核内受容体型転写因子である。Ad4BP/SF-1の相互作用因子としてSUMO化修飾に重要な因子が同定されたことから、Ad4BP/SF-1のSUMO化による活性調節機構について解析した。Ad4BP/SF-1は培養細胞内およびin vitroにおいてSUMO化されることが明らかとなり、さらに、2か所のSUMO化されるリジン残基を同定した。SUMO化されるリジンをアルギニンに置換したAd4BP/SF-1の転写活性を野生型と比較すると、他の転写因子との間にみられる相乗的な転写活性化が抑制されている可能性が示唆された。Ad4BP/SF-1はSUMO化されることにより、DNA結合活性や他のタンパクとの結合活性が阻害されないことを確認しており、SUMO化による転写活性の抑制には、何らかの抑制性の因子を介するものであると考えられた。そこで、Ad4BP/SF-1のSUMO化による転写活性の抑制機構を明らかにするため、SUMO化Ad4BP/SF-1に結合する因子の同定を試みた。大量の浮遊培養細胞より核抽出液を調製し、in vitroにおいてSUMO化したAd4BP/SF-1とのpull down assayを行ったところ、SUMO化Ad4BP/SF-1特異的に結合する一つの因子を見いだした。質量分析法により同定した因子は、ATPaseドメイン構造よりクロマチンリモデリングファクターであると推測された。現在までに、同定した本因子を培養細胞に強制発現させ、核抽出液を用いたpull down assayにおいて、SUMO化されたAd4BP/SF-1との結合が確認できた。今後は、本因子の解析を通じて、SUMO化による転写調節のクロマチンリモデリングを介する新たな機構が明らかになるものと考えられる。

Ad4 BP/SF-1 is essential for the development of gonad accessory kidney. The interaction factors of Ad4BP/SF-1 and the important factors for SUMO modification are also determined. The activity regulatory mechanism for SUMO modification of Ad4BP/SF-1 is analyzed. Ad4BP/SF-1 cells were cultured in vitro and the SUMO residues were identified. The possibility of inhibiting the activity of the gene in the wild type is demonstrated by the comparison of the activity of the gene in the wild type with that of the gene in the wild type. Ad4 BP/SF-1 SUMO binding activity, DNA binding activity, inhibition of SUMO binding activity, inhibition of SUM In addition, the mechanism of inhibition of SUMO activity of Ad4BP/SF-1 was studied. A large number of suspended cells were cultured in vitro, and the pull down assay was performed. The specific binding factors of SUMO Ad 4 BP/SF-1 were also observed. Quality analysis method: the same factor, ATPase structure, etc. Now, the same factor is present in cultured cells under stress, nuclear extract is pulled down in the assay, and SUMO is confirmed by Ad4BP/SF-1 binding. In the future, the analysis of this factor will be carried out in a timely manner.