凍結前の精漿曝露がミニブタ精子の耐凍能および受精能に及ぼす影響

冷冻前精浆暴露对小型猪精子冷冻能力和受精能力的影响

• 批准号: 03J08301
• 负责人: 河野 菜摘子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J08301/
• 关键词: 精漿; コレステロール; ミニブタ; 生体反応; 体外受精; 凍結保存; 受精能獲得; 抑制因子

先ず,本年度の目的であったミニブタ精漿が精子の細胞膜のコレステロール量の増加および膜の流動性の低下を誘起しているか否かについて検討を行った.精漿に保存した精子のコレステロール量を薄層クロマトグラフィー,filipinを用いて測定した結果,処理区間に有意な差は認められなかった.また,精漿に保存した精子の膜の流動性をM540およびFACSを用いて測定したが,この結果においても処理区間に有意な差は認められなかった.これらの結果より,精漿が精子の耐凍能・受精能を低下させる原因は細胞膜のコレステロール量または流動性とは無関係であると考えられた.そこで,外科的手法を用いて精嚢腺排出管を切断したミニブタを作製し,その個体の精液性状および精子の受精能に及ぼす影響について検討を行った.その結果,手術後の精漿は精子の受精能を抑制しなくなること,またその時の精漿中タンパク質濃度は手術前と比較して1/10以下に減少していたことが明らかとなった.この結果から,ミニブタ精漿中の受精能抑制因子は精嚢腺から分泌されているタンパク質であると推察された.次に,精嚢腺液中の抑制因子がタンパク質であるか否か明らかにする目的で加熱処理およびprotease処理によってタンパク質を変性させた精嚢腺液に精子を保存した.その結果,タンパク質を変性させた精嚢腺液は精子の受精能を抑制しなくなったことからミニブタ精嚢腺液中の受精能抑制因子はタンパク質であると確認された.次に,50%硫酸アンモニウムを用いて回収した精嚢腺液中のタンパク質をゲルろ過カラムおよびイオン交換カラムに用いて精製を行った.その結果,活性の認められる分画には分子量約50kDaのタンパク質が検出された.また,この分子量約50kDaのタンパク質を含む分画は精子の受精能を抑制するだけでなく,精子の運動性も抑制することが明らかとなった.

ず first, the purpose of this annual の で あ っ た ミ ニ ブ タ seminal plasma が の sperm membrane の コ レ ス テ ロ ー ル in の raised add お よ び membrane の low liquidity の を induced し て い る か no か に つ い て 検 line for を っ た. Seminal plasma に save し た sperm の コ レ ス テ ロ ー を thin-layer ク ル quantity ロ マ ト グ ラ フ ィ ー, filipin を with い て determination し た as a result, the poor 処 manage interval に intentionally な は recognize め ら れ な か っ た. ま た, seminal plasma に save し の た の sperm membrane fluidity を M540 お よ び both FACS を with い て determination し た が, こ の results に お い て も 処 area Difference between に intentionally な は recognize め ら れ な か っ た. こ れ ら の results よ り, seminal plasma が の sperm frozen resistance can, fertilization can lower を さ せ る reason は membrane の コ レ ス テ ロ ー ル quantity ま た は liquidity と は no masato is で あ る と exam え ら れ た. そ こ で, surgical technique を with い て fine 嚢 glands eduction pipe を cut し た ミ ニ ブ タ を as し, そ の individual の semen Character お よ び の sperm fertilization can に and ぼ す influence に つ い て 検 line for を っ た. そ の results, after surgery の seminal plasma は sperm の fertilization can suppress し を な く な る こ と, ま た そ の の when in the seminal plasma タ ン パ ク mass concentration は before surgery と compare し て 1/10 に reduce し て い た こ と が Ming ら か と な っ た. こ の results か ら, ミ ニ ブ タ in seminal plasma The <s:1> insemination inhibitory factor された spermatocyst gland ら ら secretion されて るタ るタ <s:1> パ パ the quality of the sperm であると examination された. に, fine 嚢 の inhibitory factor in gland liquid が タ ン パ ク qualitative で あ る か no か ら Ming か に す る purpose で heating 処 Richard お よ び protease 処 Richard に よ っ て タ ン パ ク qualitative を - sex さ せ た fine 嚢 gland fluid に sperm を save し た. そ の results, タ ン パ ク qualitative を - sex さ せ た fine 嚢 gland fluid は sperm の fertilization can suppress し を な く な っ た こ と か ら ミ The <s:1> fertilizability inhibitor in the seminal vesicular fluid of ニブタ ニブタ タ パ パ パ であると であると であると confirmation された. に, 50% sulfuric acid ア ン モ ニ ウ ム を with い て back 収 し た fine 嚢 gland in の タ ン パ ク qualitative を ゲ ル ろ too カ ラ ム お よ び イ オ ン exchange カ ラ ム に with い て refined を line っ た. そ の as a result, the active の recognize め ら れ る points draw に は molecular weight about 50 kda の タ ン パ ク qualitative が 検 out さ れ た. ま た, こ の molecular weight about 50 kda の タ ン パ The cytoplasm を contains む fraction ら sperm <s:1> fertilization ability を inhibits するだけでなく, sperm <s:1> motility <s:1> inhibits する とが とが とが とが とが

项目成果

M.Shimada: "LH receptor formation in cumulus cells surrounding porcine oocytes, and its role during meiotic maturation of porcine oocytes"Biology of Reproduction. 69. 1142-1149 (2003)

M.Shimada：“猪卵母细胞周围的卵丘细胞中 LH 受体的形成及其在猪卵母细胞减数分裂成熟过程中的作用”生殖生物学。

N.Kawano: "Motility and penetration competence of frozen-thawed miniature pig spermatozoa are substantially altered by exposure to seminal plasma before freezing"Theriogenology. 61(2-3). 351-364 (2004)

N.Kawano：“冷冻解冻的小型猪精子的活力和穿透能力在冷冻前暴露于精浆中会发生显着改变”动物发生学。