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セミインタクト細胞系を用いたアグリソーム形成機構の分子基盤とその制御機構の解析

利用半完整细胞系分析聚集体形成的分子基础和控制机制

基本信息

批准号：
03J08794
负责人：
山内忍
金额：
$ 2.18万
依托单位：
The University of Tokyo (2004-2005)Okazaki National Research Institutes (2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

アグリソームはく小胞体近傍で凝集した変異タンパクがダイニン依存性の逆行輸送により、微小管形成中心に輸送された結果、形成される凝集体構造である。このような異常タンパク質凝集・蓄積と神経変性疾患の発症との関連性が議論されているが、その形成における分子機構には未だ不明な点が多い。近年、新たに変異タンパク質を微小管形成中心に輸送することでアグリソーム形成への関与が示唆される分子としてヒストンデアセチラーゼ(HDAC)6が同定された。そこで、本年度も引き続き、すでにプロテアソーム阻害剤存在下でアグリソーム形成が確認されているABCA1タンパク質変異体のGFP融合タンパク質発現培養細胞を用いて、アグリソーム形成の分子機構におけるHDACの関与について詳細に検討した。まず、各HDAC抗体を用いて、アグリソーム形成条件下の上記細胞を免疫染色した結果、やはりHDAC6がABCA1変異体により形成されるアグリソームにも局在することが観察された。次に、HDAC阻害剤であるトリコスタチンAをプロテアソーム阻害剤とともに細胞に添加すると、アポトーシス様のDNA断片化を伴った細胞死が観察された。トリコスタチンAだけを上記細胞に添加しても変化は起きなかった。また、アグリソーム形成・非形成条件下の上記細胞ライゼートを調製し、抗アセチル化リジン抗体を用いてウエスタン解析した結果、アグリソーム形成条件下で明らかにアセチル化が減少したタンパク質バンドが検出された。ヒストンのアセチル化はクロマチン構造に影響を与え、遺伝子発現制御に関与すると考えられている。変異タンパク質蓄積時には、HDAC活性とヒストンアセチルトランスフェラーゼ活性のバランスが変化し、特定の遺伝子発現のスイッチ切り替えが起こることで細胞が細胞死を免れ、アグリソーム形成へと向かう細胞応答経路が存在するのかもしれない。

The microtubule formation center is the result of retrograde transport, and the aggregation structure is formed. The relationship between abnormal substance aggregation, accumulation, development of neurological diseases and molecular mechanism is discussed. In recent years, new technologies have been developed for the formation of micro-tubes, such as transport, transport, and transport. This year, we have conducted a detailed study on HDAC formation in the presence of protein inhibitors and confirmed the use of ABCA1 protein variants in GFP fusion protein production in cultured cells. The results of immunostaining for HDAC 6 and ABCA1 antibodies were observed in the presence of HDAC6 and ABCA1 antibodies. In addition, HDAC inhibitors can be used to detect DNA fragmentation in cells. The first step is to increase the number of cells in the cell. In addition, under the condition of formation and non-formation, the cell type is modulated, and the anti-cell type antibody is analyzed with the method of analysis. Under the condition of formation, the cell type is reduced. A study on the relationship between the structure of the earth and the evolution of the earth When different substances accumulate, HDAC activity changes, and specific genes are produced. The cells are free from cell death, and the cells are free from cell death.