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遺伝子活性化基質を用いた硬組織の再生

使用基因激活基质进行硬组织再生

基本信息

批准号：
03J09468
负责人：
丸川恵理子
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

既にクローニングされているBMP-2のcDNAを蛋白発現プラスミドベクター(Flag pc DNA3)に組み込んだ。このライゲーション後のプラスミドを大腸菌の中にトランスフォーメーションし、増殖させる。BMP-2のcDNAが正しく組み込まれているかを大腸菌からプラスミドをミニプレップにより調整し、これを制限酵素処理してインサートを確認した。また、このサブクローニングしたプラスミドベクターをIn vitroで293細胞にノンリポソーマルトランスフェクションキットを用い、遺伝子導入した。この遺伝子導入された細胞が目的の蛋白質BMP-2を発現、分泌するかどうかを、細胞をライセートして、細胞内の蛋白質と培養上澄のウエスタンブロットを行うことにより確認した。このBMP-2発現プラスミドをIn vivoで確認するため、プラスミドをマキシプレップにて大量に増殖させて、直接コラーゲンに濃度を変化させて含浸させ、ヌードマウスの筋肉内に埋入し、骨形成能を検討したが骨形成は認められなかったため、コラーゲンを当大学整形外科で開発された多孔質ハイドロキシアパタイト・コラーゲン複合体(HAp/col)に含浸させ、4週、8週、12週で再度検討したが骨形成は認められなかった。異所性に骨形成が得られないため、ラット頭蓋骨に骨欠損を形成し、その骨の場で差が得られるかどうかについて4週、8週、12週で検討したが、今回は骨形成が認められたもののプラスミド含浸させたものと単独移植との間に有意差は認められなかった。そこで、エレクトロポレーションを用いて移植直後、1日後、直後から毎日3日間遺伝子導入を行った場合で比較検討を行った。結果、すべての場合において骨形成は認められたがそれにより骨形成が促進される傾向にあったが、各群における有意差は認められなかった。

This is the first time that the BMP-2 cDNA protein has been detected. This is the most important component of the Flag pc DNA3 system. In the back of the study, the bacteria in the fungus were found to be infected with bacteria. The BMP-2 cDNA system is required to determine the number of bacteria, the bacteria. I don't know what to do, I don't know, I don't know. The purpose of this study is to detect and secrete the protein BMP-2, to detect and secrete the protein, to detect and secrete the protein, to express the protein in the cell, and to make sure that the protein is confirmed. This is the first time that BMP-2 has made sure that it is not possible to obtain a large number of colonies, direct exposure, immersion, implantation, bone formation, bone formation, and bone formation. When the orthopedic surgery department of the university started to make sure that the complex (HAp/col) contained impregnation, 4, 8, and 12 years old, the bone was formed again. Sexual bone formation, bone formation, bone loss, bone formation, bone formation After the transplantation, the first day and the third day, the first day of the transplantation, the first day, the third day, the first day, the third day, the second day, the third day, the third day, the second day, the third day, the second day, the third day. Results: the results showed that the combination of bone formation and bone formation promoted the development of bone formation, and each group was interested in bone formation.