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多能性を維持するホメオボックス遺伝子Nanogの下流因子探索

寻找维持多能性的同源框基因 Nanog 的下游因子

基本信息

批准号：
03J50711
负责人：
徳澤佳美
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J50711/
关键词：
ES細胞未分化維持 Nanog マイクロアレイ STAT3

项目摘要

Nanog過剰発現細胞においてSTAT3を完全に抑制するため、Socs3あるいはhLIFO5を過剰発現させた。これらの細胞とLIF/STAT3で未分化が維持されている野生型ES細胞はすべて未分化で形態上区別がつかない。従って分化に伴う2次的な遺伝子発現変化ではなく、NanogやStat3の直接の標的遺伝子を同定できることが期待された。これらの遺伝子発現パターンをDNAマイクロアレイにより比較した結果、候補遺伝子をいくつか同定した。これらの遺伝子のうちの一つ、Klf4(kruppel like factor 4/GKLF)はLIF/STAT3経路を抑制した時に最も発現量が変化した遺伝子であった。ノザンブロッティングにより、ES細胞とマウス成体各組織での発現を調べると、ES細胞では未分化状態の時に高発現し、分化ES細胞では発現が確認できなかった。しかし、成体臓器では精巣、肺、胃、小腸、皮膚で発現していた。Klf4cDNAをCAG発現ベクターに組み込み、ES細胞に導入してLIF存在下、非存在下での形態変化を調べたところ、Klf4過剰発現細胞はLIF非存在下でも、未分化状態を形態上維持し、分子レベルでも、未分化マーカーであるOct3/4を発現していた。また、LIF/STAT3を抑制した細胞に過剰量のLIFを加え、LIF/STAT3経路を回復させるとKlf4のmRNA量も増加したことから、Klf4はLIF/STAT3経路に属し、未分化状態維持に十分であることが示唆された。また、Klf4と同様に内在性Nanogの発現量も減少していたことから、NanogもLIF/STAT3経路に関与している可能性が示唆された。今後はKlf4やNanogがSTAT3によって直接発現調節されているのか、間接的に調節されているのかをルシフェラーゼアッセイやクロマチン免疫沈降、を行って解析していく予定である。

The Nanog filter completely suppresses the epidemic, while the Socs3 filter completely suppresses the hLIFO5 problem. There is no difference in the morphology of wild-type LIF/STAT3 cells and wild-type ES cells in terms of morphology. The two-time differentiation was accompanied by the realization of the child of the Nanog Stat3, and that of the mother of the mother. Please compare the results of the DNA test results and wait for the results to be determined. The Klf4 (kruppel like factor 4/GKLF) LIF/STAT3 path suppresses the most critical amount of downtime to reduce the number of users. In this case, we need to know that all the organizations in the ES cell are affected, that the ES cell is not differentiated and that the status is high, and that the differentiation of ES cells is successful. The essence, lungs, stomach, small skin, and skin of the body, the body, the stomach, the stomach, the skin, and the skin are all fine. The Klf4cDNA CAG detects the status of the cell, the ES cell participates in the presence of the LIF, the non-existent, the Klf4 filter, the non-existent, the undifferentiated, the undifferentiated, the molecular, the undifferentiated, the negative. The amount of LIF, LIF/STAT3, Klf4, LIF/STAT3, and undifferentiated status maintenance is significantly higher than that of the control group. The same as the internal Nanog, Klf4, LIF/STAT3, LIF/STAT3, possibility, and so on, the possibility of instigation. In the future, Klf4