枯草菌転写制御蛋白質の体系的機能解析

枯草芽孢杆菌转录调控蛋白的系统功能分析

• 批准号: 03J61589
• 负责人: 里村 武範
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: Fukuyama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03J61589/
• 关键词: 枯草菌; 二成分制御系; グルタミン; グルタミナーゼ; グルタミントランスポーター; トランスクリプトーム; 転写制御因子; 窒素源代謝; DNAマイクロアレー解析; 2成分制御系; HTH蛋白質; クエン酸回路; 応答制御因子

昨年度の研究から機能未知二成分制御系であるycbA-ycbBが細胞外のグルタミンを感知し標的遺伝子であるybgJHオペロンを正に制御していることが明らかとなった。そこで本年度は本二成分制御系の詳細な機能解析を進めた。また標的遺伝子がコードするタンパク質の機能解析も併せて行なった。その結果、以下の知見を得ることができた。プライマーエクステンション解析、DNase Iフットプリント解析などのin vitro解析の結果、本二成分制御系の応答制御因子であるYcbBはybgJHオペロンの転写開始点上流のプロモーターを含む領域に結合していることが明らかとなった。この結合領域の配列を解析した結果、ダイレクトリピート配列を見出すことができた。このことから本二成分制御系はグルタミンを感知し、応答制御因子であるYcbBが標的遺伝子であるybgJHオペロンのダイレクトリピート配列を認識し本オペロンを直接制御していることが示唆された。さらに本二成分制御系が正に制御している標的遺伝子であるybgJ、ybgHがコードしているタンパク質の機能解析も併せて行なった。ybgJ遺伝子については遺伝子クローニングを行い、大腸菌でのタンパク質発現系を構築し酵素活性を測定した。その結果、ybgJ遺伝子がコードしているタンパク質はグルタミナーゼ活性を有していることが明らかとなった。ybgH遺伝子についてはラジオアイソトープで標識されたグルタミンを用いてグルタミンの取り込み実験を行なった。その結果YbgHタンパク質がグルタミンの取り込みを行なっていることが確認できた。以上の結果から機能未知二成分制御系であるycbA-ycbBはグルタミンを感知しグルタミナーゼとグルタミントランスポーターをコードするybgJHオペロンを正に制御することによってグルタミンの取り込みと代謝を行なっていることが明らかとなった。本研究成果は現在、Journal of Bacteriologyに投稿中である。

YcbA-ycbB two-component control system with unknown function This year, the two-component system has been analyzed in detail. The function analysis of the target document is carried out in the following ways: The results are as follows: The analysis results of DNase I, DNase II, DNase I, DNase II, DNase I, DNase I, DNase The results of the analysis of the combination of fields are shown below. This two-component control system is based on the perception and response factors of the target. This two-component control system is composed of the following components: ybgJ, ybgH, and functional analysis. YbgJ gene expression system construction and enzyme activity determination As a result, the content of the product was changed to a higher level. YbgH The results of the survey are as follows: The above results show that the function of the two-component control system is unknown. The results of this study are published in the Journal of Bacteriology.

项目成果

Negative Transcriptional Regulation of the ilv-leu Operon for Biosynthesis of Branched-Chain Amino Acids through the Bacillus subtilis Global Regulator TnrA

• DOI: 10.1128/jb.186.23.7971-7979.2004
• 发表时间: 2004-12
• 期刊: Journal of Bacteriology
• 影响因子: 3.2
• 作者: Shigeo Tojo;T. Satomura;K. Morisaki;Ken-ichi Yoshida;K. Hirooka;Y. Fujita

Bacillus subtilis LmrA is a repressor of the lmrAB and yxaGH operons : Identification of its binding site and functional analysis of lmrB and yxaGH

枯草芽孢杆菌 LmrA 是 lmrAB 和 yxaGH 操纵子的阻遏物：鉴定其结合位点以及 lmrB 和 yxaGH 的功能分析

• 发表时间: 2004
• 期刊: Journal of Bacteriology 186 (17)
• 作者: Matsuoka;S.;Asai K;Sadaie;Y.;Satoshi Matsuoka;Tatsuya Fukushima;Masakuni Serizawa;Ken-ichi Yoshida
• 通讯作者: Ken-ichi Yoshida

Elaborate transcription regulation of the Bacillus subtilis ilv‐leu operon involved in the biosynthesis of branched‐chain amino acids through global regulators of CcpA, CodY and TnrA

• DOI: 10.1111/j.1365-2958.2005.04635.x
• 发表时间: 2005-06
• 期刊: Molecular Microbiology
• 影响因子: 3.6
• 作者: Shigeo Tojo;T. Satomura;K. Morisaki;J. Deutscher;K. Hirooka;Y. Fujita