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植物細胞の細胞質分裂における微小管束化タンパク質TMBP200の機能解析

植物细胞胞质分裂过程中微管成束蛋白TMBP200的功能分析

基本信息

批准号：
15770033
负责人：
安原裕紀
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kansai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770033/
关键词：
TMBP200 MOR1 GEM1 フラグモプラスト細胞分裂細胞質分裂

项目摘要

TMBP200の全長とGFPの融合タンパク質を誘導発現するBY-2細胞を作出し、さらにこの形質転換株に35Sp::mRFP-βチューブリンcDNAを導入し、微小管も可視化された株を作出した。GFP-TMBP200は、間期の細胞では細胞質全体と、一部の細胞では表層微小管に局在し、分裂期の細胞では、紡錘体とフラグモプラストに局在した。また、GFP-TMBP200の誘導発現により、高頻度で、不均一な大きさの多数の核を持つ細胞が出現した。この多核細胞は、微小管破壊剤処理による有糸分裂阻害でみられるものとよく似ていた。GFP-TMBP200の発現による微小管の脱重合は観察されなかったが、異常な形態の紡錘体が観察されたことから、GFP-TMBP200の誘導発現により微小管の脱重合とは異なる機構で紡錘体の機能が阻害されたと考えられる。この結果は、TMBP200が、有糸分裂において重要な役割を果たすことを示唆するものである。このことを確かめるために、TMBP200に特異的な2本鎖RNAの転写誘導のためコンストラクトを構築し、これをBY-2細胞に導入して、TMBP200の発現抑制を試みたところ、2本鎖RNAの転写誘導時にのみTMBP200の発現が強く抑えられる株を取得することが出来た。これらの株では、TMBP200の発現抑制により高頻度で有糸分裂が阻害された。現在これらの株に35Sp::mRFP-βチューブリンcDNAを導入し、TMBP200の発現抑制により微小管構造がどの様に変化するかを検討している。

TMBP200's full-length and GFP-fused morphology are induced in BY-2 cells. The strain of 35Sp::mRFP-β was introduced and the microtubule was visualized. GFP-TMBP200 is present in the entire cytoplasm of interphase cells, the microtubules on the surface of a part of the cells, the cells in the mitosis phase, and the spindle structure. Therefore, GFP-TMBP200 induces the appearance of high-frequency, non-uniform and large nuclei and the appearance of many cells. The treatment of multinucleated cells and microtubule rupture is done by blocking the cleavage of cells. GFP-TMBP200's appearance of microtubules, decoupling of microtubules, abnormal spindle shape, and abnormal spindle shape. , GFP-TMBP200 induces the appearance of microtubules and prevents the decoupling of microtubules and the function of spindles.このRESULTは, TMBP200が, there is a splitting of においてimportantなservice cutをfruitたすことをshows instigationするものである.このことを正かめるために, TMBP200にSpecific な2 lock RNAの転Write induction of the construction of BY-2 cells, introduction of BY-2 cells, TMBP200's inhibitory effect is suppressed, and the 2-lock RNA's inhibitory effect is induced when it is induced. The これらの区では and TMBP200 are now suppressing the high frequency of により and blocking the silt splitting. Now, これらの strains 35Sp::mRFP-βチューブリンcDNAをimportし、T MBP200 has been shown to inhibit the microtubule structure and improve the microtubule structure.