植物細胞の細胞質分裂における微小管束化タンパク質TMBP200の機能解析

植物细胞胞质分裂过程中微管成束蛋白TMBP200的功能分析

基本信息

批准号：
15770033
负责人：
安原裕紀
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Kansai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770033/
关键词：
TMBP200 MOR1 GEM1 フラグモプラスト細胞分裂細胞質分裂

项目摘要

TMBP200の全長とGFPの融合タンパク質を誘導発現するBY-2細胞を作出し、さらにこの形質転換株に35Sp::mRFP-βチューブリンcDNAを導入し、微小管も可視化された株を作出した。GFP-TMBP200は、間期の細胞では細胞質全体と、一部の細胞では表層微小管に局在し、分裂期の細胞では、紡錘体とフラグモプラストに局在した。また、GFP-TMBP200の誘導発現により、高頻度で、不均一な大きさの多数の核を持つ細胞が出現した。この多核細胞は、微小管破壊剤処理による有糸分裂阻害でみられるものとよく似ていた。GFP-TMBP200の発現による微小管の脱重合は観察されなかったが、異常な形態の紡錘体が観察されたことから、GFP-TMBP200の誘導発現により微小管の脱重合とは異なる機構で紡錘体の機能が阻害されたと考えられる。この結果は、TMBP200が、有糸分裂において重要な役割を果たすことを示唆するものである。このことを確かめるために、TMBP200に特異的な2本鎖RNAの転写誘導のためコンストラクトを構築し、これをBY-2細胞に導入して、TMBP200の発現抑制を試みたところ、2本鎖RNAの転写誘導時にのみTMBP200の発現が強く抑えられる株を取得することが出来た。これらの株では、TMBP200の発現抑制により高頻度で有糸分裂が阻害された。現在これらの株に35Sp::mRFP-βチューブリンcDNAを導入し、TMBP200の発現抑制により微小管構造がどの様に変化するかを検討している。

产生By-2细胞，该细胞诱导TMBP200和GFP融合蛋白的全长，并将35SP :: MRFP-β微管蛋白cDNA引入该转化菌株中，从而导致带有可视化的微管的菌株。 GFP-TMBP200位于相间细胞中的整个细胞质以及某些细胞中的浅表微管中，以及有丝分裂细胞中的纺锤体和fragmoplasts。此外，GFP-TMBP200的诱导表达导致具有大量核具有高频，异质大小的细胞的出现。多核细胞与微管破坏剂处理引起的有丝分裂抑制作用非常相似。尽管由于GFP-TMBP200的表达，未观察到微管的解聚化，但观察到异常的纺锤体形式，但人们认为GFP-TMBP200的诱导表达抑制了与微管降低的机制不同的机制功能。该结果表明TMBP200在有丝分裂中起重要作用。为了证实这一点，我们构建了一种用于TMBP200特异性双链RNA的转录诱导的构造，并将其引入BY-2细胞中以尝试抑制TMBP200表达，并且我们能够得到强烈抑制TMBP200表达的菌株。在这些菌株中，由于TMBP200表达的抑制，有丝分裂被高频抑制。目前，将35SP :: MRFP-β微管蛋白cDNA引入这些菌株，我们正在研究由于TMBP200表达的抑制，微管结构如何变化。