分裂終期のタバコBY-2細胞より単離した190-KDaMAPの機能解析

从末期烟草 BY-2 细胞中分离的 190-KDaMAP 的功能分析

• 批准号: 08740626
• 负责人: 安原 裕紀
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Kansai University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08740626/
• 关键词: フラグモプラスト; 微小管結合タンパク質; MAPs; 190-kDa

SDS-PAGE後PVDF膜にブロットして切り出した190-KDaMAPをBrCNにより部分分解し、得られたペプチド断片をSDS-PAGEで分離後、PVD膜にブロットした。幾つかのバンドを切り出し、ペプチドシークエンサーによってアミノ酸配列を調べた。これにより、それぞれ23、20、16、13残基の長さに4箇所のアミノ酸配列を解読する事ができた。検索の結果、得られた配列はいずれも、既知の配列との相同性が低かったため、190-kDaMAPが全く未知のタンパク質である可能性が考えられた。アミノ酸配列の情報を基に、対応するcDNAの配列を予想し、縮重が小さくなる部分を選んで、PCRのための縮重プライマーをセンスプライマーとアンチセンスプライマーを合わせて14通り合成した。PCRのための鋳型DNAとして、アフィディコリンを用いて細胞周期をG2期から前期に同調化したBY-2細胞よりSDS-LiCl法により単離した全RNAを、ポリTカラムで精製して得たmRNAからAMV逆転写酵素を用いて合成したものを用いた。作成したプライマーの意味のあるすべての組み合わせについて、TaKaRaLATaqを用いてPCRを行ったところ、多くの組み合わせにおいて、複数の産物の増幅が見られたが、幾つかの組み合わせにおいて特異的と思われる産物が増幅されたため、現在これらをTAクローンニングし塩基配列の解読を行っている。また、一箇所の部分アミノ酸配列から、二つ作成したプライマーを用いて、nested PCRによる増幅も試みている。

After SDS-PAGE, PVDF membrane was partially decomposed into 190-KDaMAP, and PVD membrane was partially decomposed into 190-KDaMAP. A number of different types of drugs are used in the treatment of cancer. The length of residues 23, 20, 16 and 13 is 4. The result of the search, the result of the search. The information base of acid alignment, the alignment of cDNA, the selection of small parts, the selection of small parts of PCR, the selection of small parts of PCR, PCR is used to isolate and purify whole RNA from G2 phase of cell cycle and to synthesize AMV reverse transcription enzyme. To create a unique combination of products, TaKaRaTaq is used for PCR, multiple combinations are used for PCR, multiple products are used for PCR, multiple combinations are used for PCR, multiple products are used for PCR, multiple combinations are used for PCR, multiple products are used for PCR, multiple combinations are used for PCR, multiple products are used for PCR, multiple One part of the DNA sequence was isolated from the other part of the DNA sequence, and two parts of the DNA sequence were isolated from the DNA sequence.