LIMキナーゼとSlingshotの結合タンパク質の同定

LIM 激酶和 Slingshot 结合蛋白的鉴定

• 批准号: 15770080
• 负责人: 大橋 一正
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770080/
• 关键词: LIMキナーゼ; Slingshot; アクチン; コフィリン; タンパク質精製; リン酸化; シグナル伝達

私たちは、細胞内アクチン骨格の脱重合・切断因子であるコフィリンを不活性化するLIMキナーゼ(LIMK)と活性化するSlingshot(SSH)の機能解析を行ってきた。コフィリンは、アクチン骨格のダイナミクスを調節する重要な因子の一つであるが、その活性の時間的・空間的な制御機構は未だ不明な点が多く残されている。細胞への増殖因子刺激において、LIMKは低分子量G蛋白質Rhoファミリーの下流で活性化されコフィリンをリン酸化(不活性化)するが、細胞内のコフィリンは全体として脱リン酸化(活性化)される。これは、SSHが協調したシグナルによって活性化されているためと考えられる。SSHはPI3キナーゼの下流で活性化されることが明らかとなっているが、Rhoファミリーの活性化とどのように連動しているかは不明であった。本研究は、protein Aの一部とカルモジュリン結合ペプチドの配列をタンデムに並べた精製用タグ(TAP-tag)を付加したLIMKとSSHを用いて、これらの活性調節因子、局在を規定する足場蛋白質の同定を試みた。この方法により、これまで非特異的に吸着した蛋白質によって隠れていた特異的な結合蛋白質の候補を、LIMK,SSH各々において検出することに成功した。それらを質量分析機によって解析した結果、SSHに結合した蛋白質の一つが、低分子量G蛋白質Rhoファミリーの活性化を行うグアニンヌクレオチド交換因子の一つであることが明らかとなった。これは増殖因子の刺激によってSSHと同様にラメリポディアに局在変化することから、SSHをラメリポディア内に集積させ、LIMKによってリン酸化されてアクチンから遊離したコフィリンを効率良く再活性化させる働きを持つことが示唆される。また、LIMKについては、LIMドメインに特異的に結合していると思われる蛋白質を検出していたが、質量分析による解析の結果、非特異的に吸着したものであることが明らかとなった。

The function analysis of LIM (LIMK) and active Slingshot(SSH) in the cell is carried out. The important factors of time and space control mechanism are not clear points and many residual factors. Cell growth factor stimulation, LIMK low molecular weight G protein Rho protein downstream activation, intracellular protein whole deacidification (activation). This is the first time I've ever been in a relationship with someone else. PI3 is activated in the downstream direction. Rho is activated in the downstream direction. In this study, A part of protein A was studied by combining protein A with TAP-tag, adding LIMK and SSH, regulating factors of activity, and determining the identity of protein in the field. This method was successful in detecting non-specific binding proteins, specific binding proteins, LIMK and SSH. The results of mass spectrometry analysis, SSH binding, protein activation, low molecular weight G protein Rho binding, and exchange factor activation were analyzed. The stimulation of this reproductive factor is called SSH, which is the same as SSH, which is the same as SSH. LIM, LIM

项目成果

Gaspase-mediated cleavage and activation of LIM-kinase 1 and its role in apoptotic membrane blebbing.

Gaspase 介导的 LIM 激酶 1 裂解和激活及其在细胞凋亡膜起泡中的作用。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Genes Cells 9・6
• 作者: Tsumura Y. et al.;Tomiyoshi G. et al.
• 通讯作者: Tomiyoshi G. et al.

Kaji, N. et al.: "Cell Cycle-associated Changes in Slingshot Phosphatase Activity and Roles in Cytokinesis in Animal Cells."J.Biol.Chem.. vol.278. 33450-33455 (2003)

Kaji, N. 等人：“弹弓磷酸酶活性的细胞周期相关变化以及动物细胞细胞分裂中的作用。”J.Biol.Chem.. 第 278 卷。

CD29 integrin- and LIMK1/cofilin-mediated actin reorganization regulates the migration of haematopoietic progenitor cells underneath bone marrow stromal cells

• DOI: 10.1111/j.1356-9597.2004.00726.x
• 发表时间: 2004-04-01
• 期刊: GENES TO CELLS
• 影响因子: 2.1
• 作者: Konakahara, S;Ohashi, K;Tsuji, T
• 通讯作者: Tsuji, T

Sprouty-4 negatively regulates cell spreading by inhibiting the kinase activity of testicular protein kinase.

Sprouty-4 通过抑制睾丸蛋白激酶的激酶活性来负向调节细胞扩散。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Biochem.J. Epub Ahead of print
• 作者: Tsumura Y. et al.

A pathway of neuregulin-induced activation of cofilin-phosphatase Slingshot and cofilin in lamellipodia.

• DOI: 10.1083/jcb.200401136
• 发表时间: 2004-05-24
• 期刊: The Journal of cell biology
• 作者: Nagata-Ohashi K;Ohta Y;Goto K;Chiba S;Mori R;Nishita M;Ohashi K;Kousaka K;Iwamatsu A;Niwa R;Uemura T;Mizuno K
• 通讯作者: Mizuno K