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線虫における二重の酵素機能を持つタンパク質、Bam-1の構造と機能

线虫中具有双重酶功能的蛋白质 Bam-1 的结构和功能

基本信息

批准号：
15770081
负责人：
鈴木匡
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Osaka University (2004)The University of Tokyo (2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770081/
关键词：
線虫ペプチド:N-グリカナーゼ神経分岐

项目摘要

本研究は線虫に見い出された神経分岐に異常をきたす原因遺伝子産物であるBam-1タンパク質が、我々が見い出した糖鎖脱離酵素PNGaseホモログであるという知見を契機として、そのタンパク質の生化学的性質を調べて、表現型発現のメカニズムに迫るのが目的である。本酵素はN端にチオレドキシンドメイン、中央にPNGaseドメインを持ち、構造上2重の酵素活性を持つことが予想されていた。昨年までの研究で、本酵素のPNGaseドメインに変異が入ることで神経分岐の異常がもたらされ、チオレドキシンドメインに変異が見出されなかったことから、PNGase活性と表現型の関連性があることが明らかになった。また、我々が開発したin vitroの酵素活性アッセイ法を用いて(下記研究発表参照)、Bam-1タンパク質がPNGaseを活性を持つこと、また出芽酵母を用いたin vivoのアッセイ法を用いてチオレドキシン活性の存在を明らかにしている。今年度はさらに本タンパク質の酵素活性を明確にするために、PNGase活性に関してやはり出芽酵母を用いて、植物由来のタンパク質であるリ生体内でのリシン無毒化変異体を用いた小胞体関連分解(ERAD)のアッセイ系を確立し、このタンパク質がin vivoにおいてPNGaseによる糖鎖の脱離をうけるかどうかを調べた。その結果、PNGaseがリシンを基質として糖鎖の脱離を行うことをウエスタン解析により見い出し、in vivoのPNGase活性測定系を確立した。今回この系を用いて線虫の酵素活性をin vivoにおいても活性測定が出来ることが分かった。

In this study, we found that there was an abnormality in the brain differentiation caused by gene products, such as Bam-1, Bam-1, Bam- The enzyme is composed of N-terminal and central PNGase sites, and structurally, two enzyme sites. In the past year's study, the PNGase activity of this enzyme was different from that of other enzymes, and the relationship between PNGase activity and phenotype was different. The enzyme activity in vitro was detected in the application of the enzyme method (refer to the research table below), and the activity of PNGase in Bam-1 protein was detected in the application of the budding yeast method in vivo. In this year, the enzyme activity of this protein was clearly determined, and the activity of PNGase was related to the use of budding yeast, the origin of plant, and the use of small cell-associated decomposition (ERAD) in vivo. As a result, the PNGase activity assay system was established. The enzyme activity of the parasite was measured in vivo.