ミトコンドリア蛋白質輸送に関わる細胞質因子並びに膜透過装置の解析

参与线粒体蛋白转运的细胞质因子和膜渗透设备分析

• 批准号: 15770129
• 负责人: 小宮 徹
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: Nagahama Institute of Bio-Science and Technology (2004)Kyushu University (2003)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15770129/
• 关键词: ミトコンドリア; 膜透過; 前駆体; 局在化シグナル; 細胞内輸送; タンパク質輸送; 分子シャペロン; TOM

本研究の目的は、高等動物に於けるミトコンドリア蛋白質輸入の輸入反応の素過程を明らかにするため、その初期段階である、「細胞質因子によるミトコンドリア蛋白質前駆体の認識並びにミトコンドリア外膜の受容体へのターゲティング」に注目し、その分子機構を解明することである。これまでに我々は、ミトコンドリア蛋白質前駆体の輸送を担う分子をラット肝臓細胞質より精製し、「ミトコンドリア輸入促進因子(MSF)」と名付けた。前年度の研究の結果、以下の事実を明らかにした。(1)前駆体/MSF複合体を界面活性剤を用いて可溶化したミトコンドリアとインキュベートし、その後免疫共沈をおこなうと、前駆体並びにMSFは新規の外膜因子OM37と共沈したことから、これら三者は複合体を形成することが分かった。(2)意外なことに、この複合体の中には既知の外膜因子であるTom20が含まれていることがわかった。(3)この複合体はATPの共存下で解離した。(4)ATPの存在下でタイムコースを追うと、時間経過に伴って、前駆体分子がTom20/OM37の段階から、膜透過チャネルの主成分である、Tom40に移行することが分かった。今年度は、これらの成果を踏まえて、さらに実験をすすめた結果、以下のことを明らかにした。(1)前駆体/MSF複合体を、大腸菌で発現かつ精製したOM37の細胞質ドメイン(OM37CD)とインキュベートし免疫沈降を行うと、これらは共沈してくることから、これら三者は複合体を形成することが分かった。(2)(1)の複合体は、ATPの共存下で解離した。すなわち、界面活性剤を用いて可溶化したミトコンドリアで得られた結果と同様な結果が、OM37CDを用いた実験でも得られた。以上の結果から、OM37が1前駆体/MSF複合体のミトコンドリア外膜上の受容体として機能している可能性が高いと考えられる。現在、OM37のRNAiを行うための予備実験を進めており、これらの成果を論文にするために準備を行っている。

は の purpose this study, the higher animals に in け る ミ ト コ ン ド リ ア protein input の input against 応 の element process を Ming ら か に す る た め, そ の early Duan Jie で あ る, "cytoplasmic factors に よ る ミ ト コ ン ド リ ア protein before 駆 body の know and び に ミ ト コ ン ド リ ア outer membrane の is let body へ の タ ー ゲ テ ィ ン グ" に attention し, そ の を molecular institutions Explain that する とである とである. こ れ ま で に I 々 は, ミ ト コ ン ド リ ア protein before 駆 body の conveying を bear う molecular を ラ ッ ト routine liver cytoplasm よ り refined し, "ミ ト コ ン ド リ ア input promoting factor (MSF)" と name pay け た. The results of the previous year 's <s:1> research <e:1>, the following facts are を clear ら に に た た. (1) the former 駆 body/MSF complex を interface active tonic を い て solubilization し た ミ ト コ ン ド リ ア と イ ン キ ュ ベ ー ト し, そ の after immunization were shen を お こ な う と, former 駆 body and び に MSF は new rules の outer membrane factor OM37 と shen total し た こ と か ら, こ れ は ら three complex を form す る こ と が points か っ た. (2) the accident な こ と に, こ の complex in の に は already know の outer membrane factor で あ る Tom20 が containing ま れ て い る こ と が わ か っ た. (3) Under the coexistence of the <s:1> <s:1> complex で ATP <e:1>, で dissociates to た. (4) the presence of ATP の で タ イ ム コ ー ス を chase う と and time 経 に っ て, former 駆 molecular が Tom20 / OM37 の Duan Jie か ら, membrane through チ ャ ネ ル の principal component で あ る, Tom40 に transitional す る こ と が points か っ た. Our は, こ れ ら の results を tread ま え て, さ ら に be 験 を す す め た results, the following の こ と を Ming ら か に し た. (1) the former 駆 body/MSF complex を, coliform で 発 now か つ refined し た OM37 の cytoplasm ド メ イ ン (OM37CD) と イ ン キ ュ ベ ー ト し immune sink を line う と, こ れ ら は shen total し て く る こ と か ら, こ れ は ら three complex を form す る こ と が points か っ た. (2)(1) Under the coexistence of the <s:1> complex で and ATP <e:1>, で dissociates to た. す な わ ち, interfacial active tonic を い て solubilization し た ミ ト コ ン ド リ ア で have ら れ と た results with others in な results が, OM37CD を with い た be 験 で も must ら れ た. の above results か ら, OM37 が 駆 body before 1 / MSF complex の ミ ト コ ン ド リ ア の popularity on the outer membrane, let body と し て function し て い likely が る い と exam え ら れ る. Line now, OM37 の RNAi を う た め の reserve be 験 を into め て お り, こ れ ら result を の に す る た め に preparation line を っ て い る.