权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

エチレンセンサーたんぱく質ETR1のシロイヌナズナによる発現系構築と構造解析

拟南芥乙烯传感蛋白ETR1表达系统的构建及结构分析

基本信息

批准号：
15780080
负责人：
菊地晶裕
金额：
$ 2.24万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

植物ホルモンの中で最も単純な分子構造を持つエチレンは、植物の発生から枯死に至るまでの様々な過程において重要な役割を果たしている。しかし、植物のエチレン濃度感知機構や、その情報伝達機構に関しては不明な点が多く残されている。本研究では、シロイヌナズナ由来のエチレンセンサータンパク質ETR1におけるエチレン感知とその情報伝達機構を解明することを目的として、ETR1の大量発現系構築を行った。平成16度は、シロイヌナズナの培養細胞T87を用いた発現系構築を行い、5系統の形質転換した培養細胞を得ることができた。得られた細胞の膜画分を用いてウェスタンプロットを行ったところ、ETR1の強発現を2系統で確認できた。1度の培養で得られるETR1は微量(ナノグラムオーダー)であり、より高発現を目指して培養条件の検討を行なったが、飛躍的な向上には至っていない。微量ではあるが、発現したETR1のHis-tagアフィニティカラムによる精製条件の検討も行った。ETR1は膜タンパク質であり、界面活性剤での可溶化が必要となるが、用いる界面活性剤によってはアフィニティカラムに非特異的に吸着してしまった。しかし、最適な界面活性剤を選択することができれば、精製も可能であると思われる。ETR1は銅イオンを含むので、本研究では精製後にX線吸収スペクトル(XAS)の測定を行う計画であった。しかし、本研究のように微量の試料しか得られない場合、従来の測定システムでの測定は困難である。そこで、平成16年度には微量XAS測定に向けた実験もSPring-8で行なった。その結果、本研究の対象試料ではないが、Rieske-type [2Fe-2S]型クラスターを有する金属タンパク質の微量XAS測定から、鉄イオンの配位数を決定することに成功し、その結果を論文として発表することができた。

The purest molecular structure of plants is the most important part of the process from birth to death. The plant concentration sensing mechanism and the information transmission mechanism are related to the unknown point and the residual point. This study aims to clarify the origin of ETR1 and the information transmission mechanism of ETR1. T87 cells in culture were used to construct a system of morphological changes in culture cells. The membrane of the cell is divided into two parts, namely, the first part and the second part. 1 degree of culture was obtained. ETR1 was found to be trace, high, and pointed to the culture conditions. Trace amounts of ETR1 are found in His-tag and refined under different conditions. ETR1 is a non-specific adsorption agent that is soluble in a membrane and active in an interface. Select the best interface active agent and refine it. ETR1 contains copper, and this study is a project to determine X-ray absorption spectrum (XAS) after purification. In this study, trace amounts of samples were obtained in different situations, and the determination of samples was difficult. In 2016, the trace amount of XAS was determined by SPring-8. The results of this study were successful in determining the coordination number of metal and iron in the sample of Rieske-type [2Fe-2S] type.