黒毛和種筋肉内脂肪をモデルとした脂肪組織特異的遺伝子の発現に関する研究

以日本黑色品种肌内脂肪为模型的脂肪组织特异性基因表达研究

• 批准号: 15780191
• 负责人: 河上 眞一
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: National Agricultural Research Organization
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15780191/
• 关键词: 黒毛和種; 筋肉内脂肪; PCR; サブトラクション; 遺伝子

近年のヒトゲノムプロジェクトの知見から、脂肪細胞は糖尿病、高血圧、高脂血症等に代表される生活習慣病の原因と見なされており、その重要性が注目されている。また畜産分野においても、牛肉価格を決定する主要因はロース部分における筋肉内脂肪(筋肉繊維に侵入・沈着した脂肪組織)の多少、すなわち霜降りであるため、筋肉内脂肪に効率よく飼料エネルギーを分配させつつ他の脂肪部位を減少させるための新しい飼養技術開発が要求されている。よって本研究は、霜降り肉を多く産生するように長期間に渡り育種選抜され、筋肉内脂肪含量を増加させる遺伝子を多数保有していると予想される黒毛和種を脂肪蓄積のモデル動物として、黒毛和種筋肉内脂肪と他の部位に蓄積する脂肪組織との遺伝子発現の差異をPCR subtraction法を用いて検出し、脂肪細胞の組織特異的な増殖、分化、蓄積の生理学的モデルを構築することを目的とした。肥育期間中の各時期に黒毛和種より皮下、筋肉間、筋肉内脂肪を採取し、メッセンジャーRNAを抽出した。逆転写酵素によりメッセンジャーRNAから相補的DNAを合成し、PCR増幅した。筋肉内脂肪と他の脂肪組織の相補的DNAとを混合してPCRサブトラクション反応を行い、筋肉内脂肪にのみ発現するPCR断片を濃縮した。そのPCR断片をプラスミドに導入してサブトラクションライブラリーを構築した。発現の増減が観察されるクローンを同定するためにそのライブラリーのディファレンシャルスクリーニングを行い、複数の陽性クローンを得た。陽性クローンの部分配列をシークエンスしたところ、イソメラーゼ等の代謝酵素群の配列と一致した。しかし筋肉組織の混入による擬陽性サンプルも観察されたため、脂肪組織の純度を向上させるためにも、培養系の確立の必要性が示唆された。

In recent years, the importance of fat cells in diabetes mellitus, hypertension and hyperlipidemia has been noticed. The main factors determining the quality of beef and beef are the amount of fat in muscle (muscle fat invasion and subcutaneous fat), the rate of fat in muscle, the distribution of feed and the reduction of other fat parts, and the development requirements of new feeding technology. In the present study, the differences in the production of subcutaneous fat and the development of adipocytes were detected by PCR subtraction method during long-term breeding selection, increase in fat content in muscle, and majority retention of adipocytes. The purpose of accumulation During the fattening period, the hair and seed fat were extracted from the skin, muscle and muscle. Reverse transcription enzymes, RNA, complementary DNA synthesis, PCR amplification DNA from muscle fat and subcutaneous fat is mixed and PCR fragments from muscle fat are concentrated. The PCR fragment was constructed by the following steps: The discovery of the increase in the number of cases, the number of cases. The sequence of metabolic enzyme groups in the positive and negative regions is consistent. It is necessary to establish culture system for the purpose of improving the purity of subcutaneous fat.