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NLKによるGroucho/TLEファミリーの活性制御機構の解析

NLK分析Groucho/TLE家族活性调控机制

基本信息

批准号：
15790164
负责人：
白壁恭子
金额：
$ 2.24万
依托单位：
Tokyo Medical and Dental University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790164/
关键词：
NLK Groucho TLE リン酸化

项目摘要

これまでの研究でWntシグナルを抑制的に制御するセリン/スレオニンキナーゼNLKが、同じくWntシグナルを抑制する事が知られているコリプレッサータンパク質TLE/Grouchoファミリーと複合体を形成する事、ほ乳類培養細胞内でNLKと共発現するとTLE/Grouchoファミリーのリン酸化が増大する事、をそれぞれ明らかにしていた。これらの結果はNLKによるTLE/Grouchoファミリーのリン酸化を介したWntシグナル抑制機構の存在を示唆するものであった。そこで、本年度はTLE/Grouchoファミリー分子内でNLKによってリン酸化される残基を特定し、その残基のリン酸化がTLE/Grouchoファミリーの活性をどのように制御するか明らかにする事を目的とした。昨年度の研究からTLE/GrouchoファミリーのC末側領域がNLKでリン酸化される事が示されていたので、セリン/スレオニン残基を含むいくつかのC末側領域について欠失変異体を作製し、NLKによるリン酸化を検討した。その結果、いくつかの重複しない欠失変異体でNLKによるリン酸化の減少がみられた。この結果はNLKがTLE/Groucho内の複数のセリン/スレオニン残基をリン酸化しうる事を示している。更にNLKによるリン酸化が示された領域に含まれるセリン/スレオニン残基をアラニン残基に置換した変異体を作製し、NLKによるそれら変異体のリン酸化を検討したところ、いくつかの変異体でNLKによるリン酸化の減少が見られ、これらのセリン/スレオニン残基がNLKによってリン酸化されうる事がわかった。しかし、NLKによるリン酸化の減少が見られたTLE/Groucho変異体においても、そのコリプレッサー活性は野生型と変わらなかった。この結果から、NLKによって複数のリン酸化サイトが総合的にリン酸化される事がTLE/Grouchoファミリーの活性制御に必要である可能性が考えられたので、更に複数のセリン/スレオニン残基をアラニン残基に置換した変異体を作製しその解析を進めている。

This study was conducted to investigate the mechanism of Wnt inhibition, such as TLE/Groucho complex formation, NLK co-occurrence in cultured milk cells, and Wnt inhibition. The result is that the NLK has a small number of active components, such as TLE/Groucho, and the Wnt inhibitor has a small number of active components. This year, TLE/Groucho was selected for intramolecular NLK, and all residues were selected for TLE/Groucho activity. Last year's study showed that the C-terminal domain of TLE/Groucho was not affected by NLK acidification, and the C-terminal domain of TLE/Groucho was not affected by NLK acidification. As a result, there is a lack of duplication and variation in NLK acidification. The results showed that the NLK/Groucho residues were separated and acidified. In addition, the NLK protein is acidified in the following fields: the NLK protein contains the amino acid residue, the amino acid residue is replaced by the amino acid residue, the NLK protein contains the amino acid residue, the amino acid residue is replaced by the amino acid residue, the NLK protein contains the amino acid residue, the amino acid residue is replaced by the amino acid residue, the amino acid residue is replaced by the amino acid residue, and the amino acid residue is replaced by the amino acid residue. NLK is active in the wild. As a result, NLK may be used to analyze the possibility of the synthesis of TLE/Groucho residues and the substitution of TLE/Groucho residues.