肺動脈平滑筋細胞の小胞体の機能とCa結合タンパクの発達に伴う変化

肺动脉平滑肌细胞内质网功能和钙结合蛋白的发育变化

• 批准号: 15790561
• 负责人: 石井 徹子
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Tokyo Women's Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15790561/
• 关键词: カルシウム; 肺血管; 血管平滑筋; 小胞体

本研究では、未熟肺動脈平滑筋細胞を用いて、1)脱分極やイノシトール3燐酸刺激による細胞内Ca濃度変化と小胞体からのCa放出を調べ、2)小胞体においてCa制御に関わっている蛋白質(リアノジン受容体、Ca-ArPase, Calsequestrin, Phospholamban)のmRNA発現、蛋白発現を調べた。実験動物:胎生31日の胎仔家兎、生後5日の新生仔家兎、生後6-12ヵ月の成獣家兎を用いた.実験標本:肺動脈単離平滑筋細胞をもちいた.各年齢群の肺動脈で径200ミクロン以下の血管よりコラゲナーゼを用い細胞を単離した.細胞内Ca分布:共焦点蛍光顕微鏡を用い、小胞体のCa分布を調べた.細胞内のCa貯蔵器官からCaを放出させる働きをもつ、カフェインやノルアドレナリンを使用して細胞内Ca貯蔵量を変化させ、細胞内Ca貯蔵量を測定した.小胞体のCaは胎仔、新生仔で、成獣に比べおおかった。カフェインで放出されるCaの量も未熟平滑筋でおおかった。分子生物学実験:肺動脈抵抗血管平滑筋における小胞体においてCa制御に関わっている蛋白質(リアノジン受容体、Ca-ArPase, Calsequestrin, Phospholamban))のmRNA発現をin situ hybhdizationにて調べた。また定量RT-PCRを施行し、PCR産物を定量したが、リアノジン受容体、Ca-ATPase, Calsequestrin, Phospholambanともに新生仔で成獣に比べおおく発現していた。このことは、新生仔ではすでに肺動脈平滑筋小胞体Ca制御機構が完成し、活発に作動していることを示唆する。

In this study, we investigated the regulation of 1) intracellular Ca concentration and Ca release from mitochondria by depolarization and 3-phosphate stimulation, 2) mRNA expression and protein expression of proteins (Ca-Arase, Calsequestrin, Phospholamban) in smooth muscle cells of immature pulmonary arteries. Animals: 31 days after birth, 5 days after birth, 6 - 12 months after birth. The lungs are smooth and smooth. Each year, the pulmonary artery diameter of the group is 200 cm, and the blood vessels below the diameter of the group are separated from each other. Intracellular Ca distribution: confocal microscopy, microscope-mediated Ca distribution in small cells. Intracellular Ca storage organs are used to determine intracellular Ca storage capacity. Ca of microcystis, neonate, mature embryo The amount of Ca released by the film is not ripe and smooth. Molecular biology: mRNA expression of proteins (Ca-receptor, Ca-Arase, Calsequestrin, Phospholamban) in pulmonary arteries resistant to vascular smooth muscle cells regulated by Ca regulation in situ hybridization. Quantitative RT-PCR was performed, PCR products were quantified, Ca-ATPase, Calsequestrin, Phospholamban, and neonatal development were detected. The control mechanism of Ca in smooth muscle cells of pulmonary artery is completed and activated.