変性網膜における神経ステロイドの機能解明への組織化学的アプローチ

组织化学方法阐明神经类固醇在退化视网膜中的功能

• 批准号: 15791004
• 负责人: 伊藤 隆雄
• 金额: $ 1.73万
• 依托单位: Wakayama Medical University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15791004/
• 关键词: 正常網膜; 神経ステロイド; 免疫組織化学; RT-PCR; 3α-hydroxysteroid dehydrogenase; 5α-reductase; 網膜; in situ hybridization; 3α-HSD

変性網膜における神経ステロイドの機能解明への組織化学的アプローチとして、成熟ラットの正常網膜での神経ステロイド合成・代謝に関する酵素である、3α-hydroxysteroid dehydrogerase(3α-HSD)の局在を、免疫組織化学およびin situ hybridizationなどの手法を用いて形態学的に検索し、タンパク、mRNAともにミュラー細胞に発現することを明らかにした。さらに3α-HSDと共にステロイドの合成・代謝に関連する酵素である5α-reductaseが正常網膜に同様に存在することがRT-PCRにより明らかになり、網膜においてこれら両酵素による神経ステロイドの合成が行われ、ミュラー細胞がその働きに関与していることが示唆された。神経ステロイドは、神経系において細胞の分化に対する作用も報告されている。そこで、網膜におけるグリア細胞であるミュラー細胞とその周囲の神経細胞の分化・発達過程における、神経ステロイド合成・代謝酵素の発現の変化とその局在について、生後1〜14日のmRNAの発現をRT-PCRにより検索した。その結果、3α-HSD,5α-reductaseともに、生後1日からmRNAの発現が認められた。生後1日の3α-HSDの局在を免疫組織化学を用いて形態学的に検索したところ、網膜最内層付近に免疫陽性反応が観察された。これらの結果から、神経ステロイド合成・代謝酵素3α-HSD,5α-reductaseと産生される神経ステロイドが未成熟な網膜において細胞の分化・発達に関与していることが示唆された。

Histochemical analysis of the functional understanding of neurotrophic factors in the developing retina, enzymes involved in neurotrophic synthesis and metabolism in the mature retina, and the presence of 3α-hydroxystroid dehydrogenase (3α-HSD) in the retina, immunohistochemistry and in situ hybridization techniques were used to detect morphological changes, mRNA expression, and cellular development. 3α-HSD and 5α-reductase are related enzymes in the synthesis and metabolism of human brain cells. RT-PCR is used to detect the presence of 3 α-HSD and 5 α-reductase in human brain cells. The role of the nervous system in cell differentiation is reported. In the process of differentiation and development of retinal cells and peripheral nerve cells, changes in the expression of neurotrophic enzymes and metabolic enzymes are detected by RT-PCR during the development of retinal cells and mRNA expression from 1 to 14 days after birth. 3α-HSD,5α-reductase, mRNA expression on day 1 after birth. Immunohistochemical staining of 3α-HSD was performed on day 1 postnatal. As a result, the production of 3α-HSD,5α-reductase, a neurotrophic enzyme, and the differentiation and development of immature retinal cells are related to the development of neurotrophic enzymes.