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細胞接着分子POEMを介した骨および歯胚形成の分子メカニズムの解明

阐明细胞粘附分子POEM介导的骨和牙胚形成的分子机制

基本信息

批准号：
15791069
负责人：
守村直子
金额：
$ 2.3万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research (2004)Showa University (2003)
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15791069/
关键词：
細胞接着分子インテグリン CD44 骨芽細胞

项目摘要

細胞接着分子POEMは、分子内のRGDモチーフを認識するα8β1インテグリンを介して骨芽細胞の接着、伸展および生存を支持する。また、MAMドメインによって細胞表面・間隙への局在性を規定している。昨年度の研究では、細胞外分泌分子に限定し、かつMAMドメインに接着性を示す遺伝子スクリーニングから細胞接着レセプターCD44を見い出した。本年度はその詳細について検討を深めた。リコンビナントタンパク質を用いたpull down法および免疫沈降法によってPOEMとCD44の会合が確認され、その会合はCD44の細胞外領域N末側に位置するヒアルロン酸結合部位が関与することがわかった。さらに、CD44を強制発現させたCOS-7細胞培養系にPOEMリコンビナントタンパク質を添加し、細胞表面への結合および局在を観察した。その結果、POEMとCD44のトランス位-相互作用が確認され、その局在は細胞突起へ集積した。さらに共焦点レーザー顕微鏡による観察から細胞表面上での局在が一致し、POEMはCD44の新規リガンドであることが明らかになった。いずれの実験においても、蛋白質の結合性はPOEM(RGE)変異型で増強するものの局在部位は全く異なっており、POEMはインテグリンとCD44の両レセプターに対するリガンドとして同時に機能し得る可能性が示唆された。POEM-IRES-GFPおよびインテグリンα8サブユニット-IRES-GFPを個々にMC3T3-E1細胞に発現させnodule形成への関与を調べた。その結果、POEM発現細胞はnoduleの縁に位置し、一方のインテグリンα8発現細胞はnodule内に位置していた。POEMはnoduleの位置や形に関わる細胞外マトリックス分子である可能性が示唆された。

The cell adhesion molecule POEM mediates the adhesion, extension and survival of bone bud cells by recognizing the presence of RGD in the molecule. The MAM is designed to regulate the nature of the cell surface and space. Last year's research revealed that extracellular secretion of molecules was limited to MAM and CD44. This year, we will discuss in detail. A pull-down method and an immunoprecipitation method were used to identify the association between POEM and CD44, and the association between POEM and CD44 and the N-terminal position of the extracellular domain of CD44 was used to identify the association between POEM and CD44. In addition, CD44 stress was detected in COS-7 cell culture line. The results showed that POEM and CD44 had a position-interaction, and the accumulation of POEM and CD44 in the cell process was confirmed. In addition, the confocal microscope can observe the surface of the cell, and the POEM can detect the surface of the cell. In the middle of the protein, the binding property of the protein is increased by POEM(RGE) variation, and the local position of the protein is completely different. The possibility of POEM variation and CD44 variation is also indicated. POEM-IRES-GFP is the first cell to be developed in MC3T3-E1 cells. As a result, POEM discovery cells are located in the middle of the node, and one side of the cell is located in the middle of the node. POEM is a molecular marker for the position of a node.