リアルタイムPCR法を用いた骨浸潤癌の術中迅速診断法に関する基礎研究

实时荧光定量PCR法术中快速诊断骨浸润癌的基础研究

• 批准号: 15791166
• 负责人: 中野 誠
• 金额: $ 1.79万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15791166/
• 关键词: リアルタイムPCR; 迅速病理診断; 骨浸潤癌

癌の外科的手術では病変の肉眼的辺縁から経験的安全域を設定し切除する。従来、病変切除断端部における癌細胞残存の有無を確認する目的で軟組織については凍結切片による術中迅速病理診断が行われてきた。しかし、骨浸潤を認める癌では骨組織が切除断端となっているのにも関わらず、現状では経験的な安全域での切除が行われるのみで、癌細胞の有無確認は不可能である。それは硬組織を含む試料では長時間を要する脱灰操作なくしてはミクロトームの刃が立たないため、軟組織と同様の診断法を適応できない事による。癌の浸潤様式は個々様々であるため、現実的には必要以上に広範囲の切除が行われているケースや、取り残しにより再発を認めるケースがある。近年、Polymerase Chain Reaction (PCR)法の普及により、1細胞レベルの微量な核酸を増幅し検出することが可能となり、癌細胞で特異的に発現している遺伝子のmRNAをPCR法を用いて増幅することが可能になった。更にリアルタイムPCR法の開発により迅速性、定量性が向上してきたため、同手法を利用した骨浸潤癌切除断端部における術中迅速診断に関する研究を計画した。本年度はまず(1)担癌マウスの作成と(2)脱灰標本切片によるIn-situ hybridizationによる癌細胞の局在部位同定をする予定としていた。担癌マウスを作成した後にマウス脛骨・大腿骨において規格化された脱灰切片標本を作る必要があった。また、H-E標本とIn-situ hybridization標本の作製を行い状態の良い標本を作るためには新鮮な試料から安定して迅速に作製することが必要であると考えた。そこで本研究では手始めに担癌マウス作成後の試料作製に当り手技の安定化を図るため実験器具の作製を行った。本実験器具の作製はフルヤ工業(株)に依頼して行った。設計・試作まで行った段階の平成15年6月中旬に一身上の都合が生じ、研究継続が困難な状況となったため本研究を中止することとなった。平成15年6月末日付にて当研究施設を辞職することとなったため、今後行う必要があった試作実験器具の評価は、予定していた担癌マウスの作成が未実施であるため未だ出来ない状態で本研究を中断した。

Cancer surgery involves setting the safety limits of the disease to the naked eye. To confirm the presence or absence of residual cancer cells in soft tissue, frozen sections and intraoperative rapid pathological diagnosis Bone invasion is recognized. Bone tissue is excised. Status is safe. Excision is impossible. Cancer cells are not confirmed. For hard tissue samples, a long time is required for ash removal operations. For soft tissue samples, a long time is required for ash removal. The invasive pattern of cancer can be seen every day, whether it is necessary or not, whether extensive resection is carried out every day, and whether the residual tumor is re-discovered every day. In recent years, Polymerase Chain Reaction (PCR) method has been popularized, and it is possible to increase the amplitude of small amounts of nucleic acid in one cell, and it is possible to increase the amplitude of mRNA in cancer cells. In addition, rapid and quantitative development of PCR method and application of the same technique in the resection of bone invasive cancer and rapid intraoperative diagnosis are proposed. This year, we have established a number of criteria for determining the location of cancer cells. It is necessary to standardize the bone. H-E hybridization is necessary for the preparation of fresh samples. This study is aimed at the preparation of samples after the preparation of samples, and the preparation of instruments. The production of this equipment is based on the production of industrial equipment (Co., Ltd.) The design, trial and implementation of the stage and the middle of June 15, 2015, all of which were born, and the research was terminated. At the end of June 2015, the study was suspended due to the need to conduct research.