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動脈硬化退縮を目指した新しい治療法<ナノテクノロジーを用いた病変指向性NO放出薬と遺伝子治療>の検討

研究旨在消退动脉硬化的新治疗方法<针对病变的NO释放药物和利用纳米技术的基因治疗>

基本信息

批准号：
04F04243
负责人：
井口昭久
金额：
$ 1.15万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度は、遺伝子として(1)テロメア短縮を抑制するTERT(2)エストロゲン受容体α,β等(3)各種NO合成酵素(4)SiRNAを用いたNADPHoxidase遺伝子除去したベクターを用意し,培養血管内皮細胞の検討により効率よく内皮機能を改善し,細胞老化を制御できる組み合わせを検討した。#1 動脈硬化病変選択性遺伝子ウイルスベクター作成:精製済みのeNOS, iNOSのadeno-virus vectorに加え,補酵素BH_4を供給するGTPCHIのベクターを作成し,組み合わせた,NO放出能(酵素活性,NO代謝物,eNOS, iNOSmRNA,蛋白,活性酸素放出能(MLCA, FACScan)等を予定する。#2 SiRNAを用いたNADPHoxidase除去ベクター:NADPH oxidase (p47phox)のSiRNAを作成し,培養内皮細胞に導入時の活性低下を確かめた上で,adenovirus vectorを作成した。siRNAは細胞膜貫通領域での作用遮断を考えp47phoxを選択した。#3 エストロゲン受容体(ER)α,βベクター作成:ERα,βのadnovirus vectorを用いて,eNOS, iNOS及びNADPH oxidase,以下で作るTERTとの相互作用を検討した。エストロゲンと同様ERα,βともeNOSを活性化した。#4 テロメアを延長するTERT等の遺伝子ウイルスベクター:TERTをcloning,精製し,培養細胞(血管壁構成内皮,平滑筋,マクロファージ細胞)に導入し,各種老化指標(各PDLに対するテロメラーゼ活性,βガラクトシダーゼ染色性,P38MAPkinase活性等)及びアポトーシス指標(TUNNEL染色,DNA ladder,各caspase活性等)に対する影響を検討した。

This year, the gene expression is (1) inhibition of gene shortening, TERT,(2) inhibition of gene receptor alpha, beta, etc.,(3) various NO synthase enzymes,(4) removal of NADPHoxidase gene by siRNA, and the study of endothelial cell culture, efficiency, improvement of endothelial function, and cell aging control. 1. Creation of selective gene of atherosclerosis: purification of eNOS, addition of iNOS and adeno-virus vector, supplement of enzyme BH_4, creation of GTPCHI and composition of gene, determination of NO emission energy (enzyme activity,NO metabolite,eNOS, iNOS mRNA, protein, MLCA, FACScan), etc. 2 SiRNA was prepared by NADPH oxidase removal, and adenovirus vector was prepared when the activity of NADPH oxidase (p47phox) was reduced in cultured endothelial cells. siRNAs can block cell membrane penetration by selecting p47phox. The 3 STRO receptor (ER)α,β ー is created by using ERα,β and adnovirus vectors,eNOS, iNOS and NADPH oxidase, and the following interactions between TERT and TERT are discussed. The same ERα,β and eNOS activity. 4. To investigate the effects of introduction of TERT gene such as TERT into cultured cells (vascular wall forming endothelium, smooth muscle, and smooth muscle cells) on various aging indicators (PDL staining activity,β-protein staining,P38MAPkinase activity, etc.) and TUNEL staining indicators (DNA ladder, caspase activity, etc.).