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メダカを用いた内分泌かく乱化学物質の新たな検出法の開発と作用機構の解析

青鳉内分泌干扰物检测新方法的开发及其作用机制分析

基本信息

批准号：
04F04449
负责人：
林しん治 (2006)
金额：
$ 1.54万
依托单位：
Yokohama City University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

河川水のエストロゲン活性による汚濁状況を簡便に検出する手法として、エストロゲンの標的タンパクである卵膜タンパクのコリオゲニンのプロモーター領域に続いて緑色蛍光を発するタンパクの遺伝子をメダカ受精卵に導入し、エストロゲン存在下で肝臓が蛍光を発する系統を作製した。さらに、この系統のメダカを用いて、河川水中のエストロゲン活性を簡便に検索する手法を開発した。生殖腺が未分化な孵化直後の幼魚を異なる濃度のエストラジオールを含む飼育水中に曝露し、蛍光発現強度を検定した。エストロゲンへの曝露開始日令と曝露期間とを変化させ、検出の効率化を探ったところ、孵化後4日令から開始し5日間曝露するのが至適な条件であることを見いだした。この条件下で、GFP標識コリオゲニン遺伝子をヘテロに持つ個体では25ng/litterの検出感度、ホモに持つ個体では20ng/litterの検出感度が得られた。一方、抗ビテロゲニン抗体を用いたウェスタンブロットでは、50ng/litterでは有意なシグナル上昇を得られなかったが、100ng/litterでは検出可能であったが、ELISA法では12.5ng/litterで検出できた。したがって、今回開発した手法の感度は、ビテロゲニンの発現を指標としたこの二つの手法の中間に位置した。さらに、横浜市内で採取した比較的汚濁度の高い河川水試料を用いて、今回開発した手法とLS/MSによる検定とを比較したところ、これらの試料中のエストラジオール濃度は2.4-2.6ng/litterであり、今回の手法の検出最低濃度の1/10の値であった。今回開発した検査法は、河川試料濃縮などの過程を経る必要がないことから、下水処理施設の事故や機能不良などによって、高濃度のエストロゲン活性が河川水中に存在した場合は簡便に検出する手法として有効である。

In the river water system, there is an increase in the activity of the fertilized egg in the egg membrane, in the field, in the field, the fertilized egg is loaded, the fertilized egg is loaded, and the liver is affected. The equipment of the whole system shall be operated by the use of gas, water and water in rivers, rivers and rivers. After the hatching of undifferentiated gonad, the intensity of exposure and light intensity were determined in the incubation water. During the period of exposure, the first day of incubation, the fourth day of incubation and the fifth day of incubation. Under the condition, the GFP flag should be sensitive to the sensitivity of the 25ng/litter, and the 20ng/litter should be sensitive to the sensitivity. On the one hand, the anti-virus antibody was detected by Elisa, the 50ng/litter antibody was intentionally detected, the 100ng/litter antibody was detected by Elisa, and the Elisa method was used by Elisa. This time, this time, you can see that you are in a bad position in the second round of manipulation. The temperature in Yokohama city and Yokohama city is higher than that in Yokohama city. This time, the method of LS/MS is used to determine the temperature of the raw material. This time, the temperature of the material in Yokohama is 2.4-2.6ng/litter, and this time the lowest temperature is 1pm and 10kt. This time, it is necessary to do so in the process of pollution control in rivers and rivers, and it is necessary to do so in the process of pollution control. The accident equipment of sewerage equipment can cause poor accident response, and the high degree of pollution may cause pollution in the river water. If there is a risk of pollution in the river water, the operation of the equipment will cause pollution.

项目成果

期刊论文数量（6）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Establishment of the primary culture model of mouse uterine and vaginal stroma for studying in vitro estrogen effects

小鼠子宫和阴道间质原代培养模型的建立用于研究体外雌激素效应

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Experimental Biology and Medicine 231
影响因子：
0
作者：
Inada K;Hayashi S;Iguchi T;Sato T
通讯作者：
Sato T

エストロジェンが海馬に及ぼす影響と性差

雌激素对海马体的影响和性别差异

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
性差と医療 3(12)
影响因子：
0
作者：
林しん治;滝口雅人
通讯作者：
滝口雅人

Evidence that estrogen directly and indirectly modulates C1 adrenergic bulbospinal neurons in the rostrolateral medulla

雌激素直接和间接调节头外侧延髓 C1 肾上腺素能球脊髓神经元的证据

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
Brain Research 1094(1)
影响因子：
0
作者：
Wang G;Drake CT;Rosenblit M;Zhou P;Alves SE;Herrick SP;Hayashi S;Warrier S;Iadecola C;Milner TA
通讯作者：
Milner TA

Changes in alpha-estradiol receptor and progesterone receptor expression in the locus coeruleus and the preoptic area throughout the rat estrous cycle

大鼠发情周期蓝斑和视前区α雌二醇受体和孕激素受体表达的变化