アスペルギス属カビの高浸透圧応答シグナル伝達系に関する研究
曲霉属真菌高渗透压反应信号转导系统的研究
基本信息
- 批准号:04J03318
- 负责人:
- 金额:$ 1.22万
- 依托单位:
- 依托单位国家:日本
- 项目类别:Grant-in-Aid for JSPS Fellows
- 财政年份:2004
- 资助国家:日本
- 起止时间:2004 至 2005
- 项目状态:已结题
- 来源:
- 关键词:
项目摘要
アスペルギルス属カビは、産業上有用なAspergillus oryzaeやA.nigerなどの他に、病原性を有するA.fumigatusやA.flavusなどが存在し、カビ(糸状菌)特異的に効<シグナル作動性の抗真菌剤の開発が求められている。本研究では、アスペルギルス属カビのモデル生物であるA.nidulansの高浸透圧応答経路(AnHOG経路)に着目し、AnHOG経路のシグナル伝達機構の全容解明とこの経路を標的とした新規抗真菌剤のスクリーニング系の開発を目的としている。平成17年度は主に以下の研究を進めた。シグナル作動性抗真菌剤のスクリーニング系の開発平成16年度までに、AnHOG経路の遮断や恒常的活性化はA.nidulansの生育に悪影響を及ぼすことを明らかにした。このことから、AnHOG経路を標的とした抗真菌剤の開発が可能であると考え、抗真菌剤のスクリーニング系の開発を行った。AnHOG経路依存的に転写制御を受ける遺伝子のプロモーター領域にレポーター遺伝子を連結し、ストレス刺激時にレポーターの活性が経路依存的に上昇することを指標として抗真菌剤のリード化合物をスクリーニングする方法である。具体的には、グリセロール3-リン酸デヒドロゲナーゼ(gfdB)のプロモーター領域(-1000〜-1)を単難し、β-グルクロニダーゼ遺伝子(GUS)あるいは緑色蛍光タンパク質遺伝子(GFP)に連結したものをA.nidulansに導入した。1M NaClなどの高浸透圧刺激によってレポーターの活性上昇が親察され、AnHOG経路を遮断するような変異体を宿主にした場合には活性上昇は観察されなかった。さらに、AnHOG経路を恒常的に活性化し致死を引き起こす薬剤であるフルジオキソニル処理によってもレポーターの活性上昇が観察された。以上の結果から、本レポーター発現系はAnHOG経路を標的とする薬剤のスクリーニングに有効であると言える。これは、糸状菌のシグナル伝達系レポーター発現系としては世界で最初の例である。
Youdaoplaceholder0 カビ ギ ス ス belongs to カビ and is industrially useful in なAspergillus Oryzae や A.n iger な ど の に, pathogenicity を have す る A.f umigatus や A.f lavus な ど が し, カ ビ (si) specific に unseen < シ グ ナ ル actuation sex の antifungal tonic の open 発 が o め ら れ て い る. This study で は, ア ス ペ ル ギ ル ス genus カ ビ の モ デ ル biological で あ る A.n idulans の high saturate 圧 応 answer 経 road (AnHOG 経 road) に mesh し, AnHOG 経 road の シ グ ナ ル 伝 of institutions の let all interpret と こ の を 経 road mark と し た new rules antifungal tonic の ス ク リ ー ニ ン グ started の 発 を purpose と し て い る. In the 17th year of the Heisei era, <s:1> main に and below を research を advanced to めた. シ グ ナ ル actuation sex antifungal tonic の ス ク リ ー ニ ン グ started の 発 pp.47-53 16 year ま で に, AnHOG 経 road の interrupt や constant activeness は A.n idulans の fertility に 悪 influence を and ぼ す こ と を Ming ら か に し た. こ の こ と か ら, AnHOG を 経 road mark と し た antifungal tonic の open 発 が may で あ る と え, antifungal test tonic の ス ク リ ー ニ ン グ started の 発 を line っ た. Dependent に AnHOG 経 road planning write suppression を by け る heritage 伝 son の プ ロ モ ー タ ー field に レ ポ ー タ ー heritage 伝 を link し, ス ト レ ス stimulation に レ ポ ー タ ー の active が 経 rising path dependence に す る こ と を index と し て antifungal tonic の リ ー ド compound を ス ク リ ー ニ ン グ す る method で あ る. Specific に は, グ リ セ ロ ー ル 3 - リ ン acid デ ヒ ド ロ ゲ ナ ー ゼ (gfdB) の プ ロ モ ー タ ー area (1000 ~ 1) を 単 difficult し, beta グ ル ク ロ ニ ダ ー ゼ heritage 伝 child (GUS) あ る い は 蛍 green light タ ン パ ク qualitative heritage 伝 child (GFP) に link し た も の を A.n idulans に import し た. 1 m NaCl な ど の high saturate 圧 stimulus に よ っ て レ ポ ー タ ー の activity rise が pro examine さ れ, AnHOG 経 road を interrupt す る よ う な - variant を host に し た occasions に は activity rise は 観 examine さ れ な か っ た. さ ら に, AnHOG 経 road を constant に activeness し death を lead き up こ す 薬 tonic で あ る フ ル ジ オ キ ソ ニ ル 処 Richard に よ っ て も レ ポ ー タ ー の activity rise が 観 examine さ れ た. の above results か ら, this レ ポ ー タ ー 発 now is は AnHOG を 経 road mark と す る 薬 tonic の ス ク リ ー ニ ン グ に have sharper で あ る と said え る. こ れ は, si bacteria の シ グ ナ ル 伝 da system レ ポ ー タ ー 発 now is と し て は で initially の world example で あ る.
项目成果
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