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ガンマセクレターゼの同定とアミロイドベータタンパク質Aβ42の産生機序

β淀粉样蛋白Aβ42的γ分泌酶鉴定及产生机制

基本信息

批准号：
15700271
负责人：
舟本聡
金额：
$ 1.98万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

今年度の本研究では、ガンマセクレターゼによるガンマ切断のイプシロン切断依存性を検証するため、予めガンマ切断部位からはじまるAPPカルボキシル末断片(CTF41-99)をCHO細胞に発現させて、イプシロン切断が起こるか否か検討した。その結果、細胞内からγCTFと伺じ移動度の断片が検出され、質量分析の結果CTF50-99であることがわかった。しかし、ガンマセクレターゼ特異的阻害剤(L-685,458)を細胞に処理しCTF50-99の検出を試みると、細胞は処理にも関わらずCTF50-99を産生することがわかった。このことはCTF41-99を発現させて得られたCTF50-99はガンマセクレターゼとは別の機構で生じていることを示し、ガンマセクレターゼによるガンマ切断のイプシロン切断依存性を反証するには到らなかった。以上の結果と昨年の成果を含めた論文がBiochemistry誌に受理された。膜貫通部分の途中までを含むAPPのカルボキシル末端断片(CTF1-51)を細胞に発現させると、Aβ42が顕著に増加しAβ40が減少する。このCTF1-51を発現する細胞をAβ42の産生モデルとし、様々な条件でAβの産生能を調査した。まず、この細胞の膜フラクションを様々な界面活性剤で可溶化し、酵素活性(Aβ産生能)を測定した。通常のCTF1-99を発現する細胞の膜フラクションはDIGITONINで可溶化しても酵素活性を有することはないが、CTF1-51を発現する細胞の場合では酵素活性を有していた。また、産生されるAβ42の割合は依然高いままであった。一方、Blue Native PAGEにより可溶化フラクションを展開し、抗Nicastrin抗体でガンマセクレターゼ複合体を検出したところ、分子量44万に加えて30万〜25万付近にもバンドを検出した。通常のCTF1-99を発現する細胞の可溶化フラクションでは分子量44万のバンドのみ検出されることから、30万〜25万付近に現れるバンドはAβ42の産生に特異的なものと考えられる。

In this study, we examined whether or not CHO cells were developed and isolated from APP fragments (CTF41 -99). The results of cellular CTF analysis, CTF50-99, CTF50- 90, CTF A specific inhibitor (L-685,458) was used in cell processing to detect CTF50 - 99. The CTF41-99 was discovered and the CTF50-99 was discovered. The CTF50-99 was discovered and the CTF50- 99 was discovered and the CTF 50 - 99 was discovered. The above results were accepted by Biochemistry Journal. In the middle of the membrane penetration part, there was A decrease in Aβ40, an increase in Aβ 42, and a decrease in the terminal fragment of APP (CTF1 -51). Aβ42 production was investigated in cells with CTF1 -51 expression. The enzyme activity (Aβ production) of the membrane of the cell was measured. In general, the enzyme activity of cells expressing CTF1-99 is not affected by DIGITONIN. In addition, the enzyme activity of cells expressing CTF1-51 is also affected. Aβ42 is still high when it is produced. One party, Blue Native PAGE, soluble protein development, anti-Nicastrin antibody, molecular weight 440,000, molecular weight 300,000 ~ 250,000, molecular weight 300,000 ~ 250,000 Usually CTF1-99 is found in the solubilization of cells with molecular weights of 440,000 to 300,000 to 250,000.

项目成果

期刊论文数量（3）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Dictyostelium PAKc is required for proer chemotaxis

盘基网柄菌 PAKc 是促进趋化性所必需的

DOI：
发表时间：
2004
期刊：
Molecular Biology of the Cell 15・12
影响因子：
0
作者：
Shouzhen Xia^*;Tomoyuki Miyashita^*;Tsai-Feng Fu^*;et al. These authors contributed equally ot this work;Yu Katsuyama;Jason Shiotsugu;Susan Lee
通讯作者：
Susan Lee

Truncated carboxyl-terminal fragments of β-amyloid precursor protein are processed to amyloid β-proteins 40 and 42