アミロイド前駆体タンパク質のガンマ切断部位を制御する因子の探索

寻找控制淀粉样前体蛋白γ裂解位点的因素

• 批准号: 17700330
• 负责人: 舟本 聡
• 金额: $ 2.37万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2005
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2005 至 2006
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17700330/
• 关键词: 脳神経疾患; アルツハイマー; アミロイドベータ

ガンマ切断部位を制御する因子のスクリーニングのため、ガンマセクレターゼの試験管内Aβ産生系の確立を試みた。培養細胞から調製した膜フラクションを界面活性剤CHAPSOで可溶化し、その遠心上清を膜抽出液とした。これに基質C99-FLAGを添加し、Aβの産生を検討した。Aβは反応時間依存的・基質濃度依存的に産生されることがわかった。この系ではAβ40、Aβ42、Aβ43、Aβ45、Aβ48、Aβ49の分子種が同定され、可溶化前の膜とは異なりAβ46の産生を確認できなかった。しかし、ガンマセクレターゼ活性はこれまで報告されている試験管内Aβ産生系と比較しても30倍以上あり、この系はAβ産生モデルとしてメカニズムの解明や阻害剤の開発への利用が期待できる。この成果は今年度はじめに雑誌the Journal of Biological Chemistryに受理され、その後国内外のさまざまな研究室でこの系が利用されている。ホスファチジルイノシトールリン酸は脂質構成成分としては微量にしか含まれてないが、生体内でシグナル分子またはセカンドメッセンジャー前駆体として重要な機能を果たしている。ホスファチジルイノシトールリン酸がガンマセクレターゼにも影響を与えていることを考慮し、上記のガンマセクレターゼ測定系にホスファチジルイノシトールリン酸を添加し、産生されるAβとその分子種を調べた。その結果リン酸基数の上昇に伴い、Aβ産生が抑制されることを見いだした。他のリン脂質(ホスファチジルコリン)との混合で、Aβ42の産生が顕著になる条件を見いだした。

A study on the mechanism of Aβ production in the test tube Cultured cells are prepared from membrane extracts by the surfactant CHAPSO. The addition of C99-FLAG and the production of Aβ were discussed. Aβ is a time-dependent and substrate concentration-dependent product. The molecular species of Aβ40, Aβ42, Aβ43, Aβ45, Aβ48 and Aβ49 are identical and the membrane before solubilization is different. The Aβ production system in the test tube is more than 30 times higher than that in the control tube. This achievement was accepted by the Journal of Biological Chemistry and used in the research laboratories at home and abroad. The composition of lipid in the body is very small, and the function of lipid in the body is very important. The molecular species of Aβ were produced by the addition of A β and A β in the determination system. As a result, the acid base increased and Aβ production was inhibited. The conditions for the production of Aβ42 are discussed.

项目成果

Equimolar production of amyloid β-protein and amyliod precursor protein intracellular domain from β-carboxyl-terminal fragment by gamma-secretase

γ-分泌酶从 β-羧基末端片段等摩尔产生淀粉样蛋白 β-蛋白和淀粉样蛋白前体蛋白胞内结构域

• 发表时间: 2006
• 期刊: Journal of Biological Chemistry 281
• 作者: Sadakata;et al.;定方 哲史;池上 浩司;池上 浩司;Takao Honda;仲嶋一範;Satoru Funamoto et al.;Nobuto Kakuda et al.
• 通讯作者: Nobuto Kakuda et al.

Equimolar production of Aβ and AICD by γ-secretase

γ-分泌酶等摩尔产生 Aβ 和 AICD

• 发表时间: 2007
• 期刊: Proceedings of the 10th International Conference on Alzheimer's Disease and Related Disorders (印刷中)
• 作者: Sadakata;et al.;定方 哲史;池上 浩司;池上 浩司;Takao Honda;仲嶋一範;Satoru Funamoto et al.
• 通讯作者: Satoru Funamoto et al.