電気穿孔法を使った下丘を構成する特定のニューロン群の形態学的解析

使用电穿孔对构成下丘的特定神经元群进行形态学分析

• 批准号: 15700273
• 负责人: 瀧 公介
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: Shiga University of Medical Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15700273/
• 关键词: 下丘; ノシセプチン; エレクトロポレーション; コレラトキシンB; エレクトロポレーション法

ノシセプチン遺伝子のプロモーター部位にコレラトキシンBサブユニットを連結してノシセプチン産生細胞に導入された場合のみレポーター遺伝子であるコレラトキシンBサブユニットを発現する人工DNAを作成し、複数のラットの下丘にエレクトロポレーション法で導入した。標本は固定されて免疫組織化学的に解析され、コレラトキシンBサブユニットの免疫活性について下丘の神経細胞に明瞭な陽性像を得るに至った。また、コレラトキシンBサブユニットとノシセプチンおよびGABAとの単一細胞での共存も確認された。遺伝子導入において一定の成果が得られたと判断されたため、以上の内容を以って解剖学会および聴覚研究会において発表を行い、また日本音響学会聴覚研究会資料に論文として掲載された。遺伝子導入と発現には非常に高い効率での成功し、簡便な成獣ラット神経細胞への遺伝子導入法としてのエレクトロポレーション法を確立することには成功したが、多くの条件検討の結果この方法では遺伝子発現量を維持したまま局所回路の解析に適切なところまで導入細胞を減らすことが難しいことが分かり、この目的のためには別の手段を用いた方が適切であると考えられた。最新の研究においてウイルスベクターの開発が進んでおり、情報収集の結果シンドビスやレンチといった新しく実用化されたウイルスベクターが局所回路の解析目的に適していると考えられた。今後は成獣ラット神経細胞への遺伝子導入法の別目的への応用とウイルスベクターを使った形態学的解析の両者をさらに進めていきたい。

The artificial DNA method for creating and introducing multiple DNA fragments into cells producing the gene fragments in the presence of the gene fragments is described in detail below. Immunohistochemical analysis of the fixed tissue of the spleen showed that the positive image of the neurons in the hypothalamus was detected. A cell with a single cell is identified as a cell with a single cell. The above contents were published in the Journal of Anatomical Society and the Journal of Sound Society of Japan. The success rate of gene introduction and discovery is very high. The method of gene introduction into human cells is simple and easy. The method of gene introduction into human cells is established. The success rate is high. The method of gene introduction maintains the amount of gene expression. The analysis of the circuit is appropriate. The method of gene introduction into human cells is difficult to reduce. The purpose of this article is to examine the relationship between the two countries. The latest research on the development of information collection results in the application of information collection for the purpose of analysis of local loops In the future, the method of gene introduction into neurons will be used to analyze morphological changes.

项目成果

Fujiyama F, Hioki H, Tomioka R, Taki K, Tamamaki N, Nomura S, Okamoto K, Kaneko T.: "Changes of immunocytochemical localization of vesicular glutamate transporters in the rat visual system after the retinofugal denervation."The Journal of Comparative Neur

Fujiyama F、Hioki H、Tomioka R、Taki K、Tamamaki N、Nomura S、Okamoto K、Kaneko T.：“视网膜离神经支配后大鼠视觉系统中囊泡谷氨酸转运蛋白免疫细胞化学定位的变化。”比较神经杂志

コレラトキシンBサブユニットによる特定下丘ニューロン群の標識 -電気穿孔法による遺伝子導入-

用霍乱毒素 B 亚基标记特定下丘神经元组 - 通过电穿孔进行基因转移 -

• 发表时间: 2004
• 期刊: 日本音響学会聴覚研究会資料 34巻3号
• 作者: 滝公介;黒川清;力丸裕;工藤基
• 通讯作者: 工藤基

A mammalian dpy-19 homologue is expressed in GABAergic neurons

哺乳动物 dpy-19 同源物在 GABA 能神经元中表达

• 发表时间: 2005
• 期刊: Med.Mol.Morphol 38
• 作者: K.Kurokawa;Y.Tamura;Y.Kataoka;H.Yamada;T.Nakamura;K.Taki;M.Kudo
• 通讯作者: M.Kudo

Hioki H, Fujiyama F, Taki K, Tomioka R, Furuta T, Tamamaki N, Kaneko T.: "Differential distribution of vesicular glutamate trasnporters in the rat cerebellar cortex."Neuroscience. 117・1. 1-6 (2003)

Hioki H、Fujiyama F、Taki K、Tomioka R、Furuta T、Tamamaki N、Kaneko T.：“大鼠小脑皮质中囊泡谷氨酸转运蛋白的差异分布”。神经科学 117・1。