ノシセプチン疼痛受容体の純アンタゴニストの分子設計と鎮痛作用

ORL1受容体の痛み伝達機構を遮断するアンタゴニストは鎮痛剤として強く期待されている。申請者は昨年度までにORL1受容体の活性化を遮断・妨害する純アンタゴニスト、isovareroyl-RYYRIK-NH_2, Methylthio-RYYRIK-NH_2の合成に成功した。また、ORL1受容体の第二、第三、および第四膜貫通領域に注目しアミノ酸残基を網羅的にAla残基に置換するAlaスキャンニング法を実施し(1)内在性リガンド・ノシセプチンの結合に必須なアミノ酸残基、(2)ORL1受容体の活性化に重要なアミノ残基、そして(3)受容体活性化構造の構築に必須なTM間のパッキング領域に存在するアミノ酸残基を同定した。昨年度に続き、本年度はORL1受容体の純アンタゴニストの結合部位を解明するために変異受容体を用いて結合試験を行い、ORL1受容体の純アンタゴニストの結合部位に関与するいくつかのアミノ酸残基を同定した。また、アンタゴニストで飽和結合試験を行うために、アンタゴニストのラジオラベルリガンドの作製を試みた。ノシセプチンによるORL1受容体の活性化に必須な構造要因の解明においては、昨年度に続き、ORL1受容体の第一膜貫通領域に存在するアミノ酸残基を一つ一つAlaに変異しその変異受容体を用いた網羅的な解析を行った。その結果、受容体活性化構造の構築に必須なアミノ酸残基を同定した。また、ORL1受容体構築に必要なアミノ酸残基のAla変異体にGFPを融合したタンパク質を用いてそれらの細胞膜での局在を解明した。

ORL1受容体の痛み伝達機構を遮断するアンタゴニストは鎮痛剤として強く期待されている。申請者は昨年度までにORL1受容体の活性化を遮断・妨害する純アンタゴニスト、isovareroyl-RYYRIK-NH_2, Methylthio-RYYRIK-NH_2の合成に成功した。また、ORL1受容体の第二、第三、および第四膜貫通領域に注目しアミノ酸残基を網羅的にAla残基に置換するAlaスキャンニング法を実施し(1)内在性リガンド・ノシセプチンの結合に必須なアミノ酸残基、(2)ORL1受容体の活性化に重要なアミノ残基、そして(3)受容体活性化構造の構築に必須なTM間のパッキング領域に存在するアミノ酸残基を同定した。昨年度に続き、本年度はORL1受容体の純アンタゴニストの結合部位を解明するために変異受容体を用いて結合試験を行い、ORL1受容体の純アンタゴニストの結合部位に関与するいくつかのアミノ酸残基を同定した。また、アンタゴニストで飽和結合試験を行うために、アンタゴニストのラジオラベルリガンドの作製を試みた。ノシセプチンによるORL1受容体の活性化に必須な構造要因の解明においては、昨年度に続き、ORL1受容体の第一膜貫通領域に存在するアミノ酸残基を一つ一つAlaに変異しその変異受容体を用いた網羅的な解析を行った。その結果、受容体活性化構造の構築に必須なアミノ酸残基を同定した。また、ORL1受容体構築に必要なアミノ酸残基のAla変異体にGFPを融合したタンパク質を用いてそれらの細胞膜での局在を解明した。