免疫系シグナル伝達分子DAP12によるオリゴデンドロサイト機能制御の解析

免疫系统信号分子DAP12对少突胶质细胞功能的调节分析

• 批准号: 15700284
• 负责人: 海部 知則
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15700284/
• 关键词: DAP12; オリゴデンドロサイト; ミエリン形成; グリア細胞; 活性化シグナル

免疫細胞に発現し活性化シグナルを伝達するDAP12(DNAX Activating Protein 12)が、統合失調症様の症状を呈すると共に若年性痴呆を必発して死に至る那須・ハコラ病の原因遺伝子であることが近年報告された。そこで我々は個体・細胞レベルで疾患発症にいたるメカニズムを詳細に解析する目的で、独自にDAP12遺伝子欠損マウスを作製した。DAP12欠損マウス由来の脳切片を組織学的に解析した結果、視床中心性のミエリン塩基性タンパクの発現減少と視床領域のミエリン形成異常を観察した。さらに、野生型マウスにおいてオリゴデンドロサイトとミクログリアにDAP12の発現を確認し、DAP12はグリア細胞で機能し正常なミエリン形成に関与していると考えられた。以上の結果を基に、我々はDAP12を介した活性化シグナルによるオリゴデンドロサイトの機能制御を細胞レベルで解析する計画を着想した。オリゴデンドロサイトにおけるDAP12の機能解析を進めるうえで、オリゴデンドロサイトの純粋な細胞集団を回収し機能解析を行うことが初代培養法では困難なため、不死化を目的として作製された温度感受性SV40Tトランスジェニックマウス(SV40Tマウス)を用いて生理機能を保持した野生型とDAP12欠損型の不死化オリゴデンドロサイト細胞株の樹立を試みた。野生型SV40Tマウスの前脳を用いて混合グリア細胞を培養した後、振とう法により浮遊細胞をオリゴデンドロサイトとして回収したが増殖性の高い不死化細胞株の樹立は困難であった。そこで神経前駆細胞として培養した細胞塊からオリゴデンドロサイトの誘導を試みた結果、オリゴデンドロサイト様の形態を示す細胞を多数確認した。しかしながら、これらの細胞においても長期培養が可能な不死化オリゴデントロサイト細胞株の樹立は困難であった。今後、オリゴデンドロサイトの培養に必須な増殖・分化因子の同定を進め、不死化オリゴデンドロサイト細胞株の樹立を実現し、DAP12によるオリゴデンドロサイトの機能制御の解析につなげたいと考えている。

最近有报道称，表达免疫细胞并传播激活信号的DAP12（DNAX激活蛋白12）是NASU-Hakora病的致病基因，该病的基因出现了类似精神分裂症的症状，并导致由于不可避免地患上年轻痴呆症而导致死亡。因此，我们独立创建了缺乏DAP12基因的小鼠，目的是对导致个体和细胞水平疾病发展的机制进行详细分析。对DAP12缺陷小鼠的脑切片的组织学分析表明，丘脑区域中丘脑中央髓磷脂碱性蛋白和髓磷脂发育不良的表达降低。此外，我们证实了野生型小鼠中少突胶质细胞和小胶质细胞中DAP12的表达，并且人们认为DAP12在神经胶质细胞中起作用，并且参与正常的髓磷脂形成。基于上述结果，我们构想了一项计划，通过在细胞水平上通过DAP12介导的激活信号来分析少突胶质细胞的功能调节。在对少突胶质细胞中DAP12的分析中，很难使用原发性培养方法恢复和分析少突胶质细胞的纯细胞种群，因此我们试图建立野生型和DAP12缺陷型的野生型和dap12不体化的少突细胞系，该细胞使用温度固定的SV40 Transice sv40 Transice sv40 Trespenicmentententententrocigy-dendentrocyte MOLIGDENDROCYTER）（永生化。在使用野生型SV40T小鼠的前脑培养混合神经胶质细胞后，通过摇动将浮动细胞作为少突胶质细胞收集，但是很难建立具有高增殖特性的永生细胞系。因此，我们试图诱导从培养为神经祖细胞的细胞肿块中诱导少突胶质细胞，并发现大量表现出少突胶质细胞样形态的细胞。然而，很难建立永生的寡素细胞系，该细胞系可以在这些细胞中长期培养。将来，我们希望继续鉴定少突胶质细胞培养必不可少的增殖和分化因子，建立永生的少突胶质细胞系，并通过DAP12分析少突胶质细胞的功能控制。