ファゴサイトーシス時に働くシグナルカスケードのリアルタイム解析

实时分析吞噬过程中发生的信号级联

• 批准号: 15700287
• 负责人: 上山 健彦
• 金额: $ 2.24万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15700287/
• 关键词: ファゴサイトーシス; 活性酸素; Protein kinase C; Diacylglycerol kinase; Fcγ receptor; microglia; 食胞

Fcγ receptorを介したファゴサイトーシス時におけるシグナルカスケードの解明を、PKC分子種、Diacylglycerol kinase (DGK)分子種にGFPを標織しmicrogliaに発現させ、IgGで標識したビーズを貪食させ、共焦点コンフォーカル顕微鏡下でリアルタイム観察することにより行った。1,PKC分子種の中でβIPKCとεPKCのみが、食胞膜に限局して一時的に集積すること、この2種の集積様式が異なっていることをつきとめた。さらに、βIPKCの集積機序の詳細な解明に努め、βIPKCは食胞膜で限局的に産生されるdiacylglycerolとオシレーションを伴う細胞内のカルシウムの上昇により、オシレーションを伴って食胞膜に限局的に集積することがわかった。2,βIPKCのファゴサイトーシス時における機能を解明するため、カルシウム依存性PKCの選択的阻害剤を用いて、Fcγ receptor刺激時の活性酸素産生を測定した。活性酸素の産生を(1)細胞外への活性酸素産生、(2)食胞内への活性酸素産生に分けて考えると、(1)はβIPKCに完全に依存したが、(2)は部分的に依存していた。3,さらにPKCの機能を調節していると考えられるDGKのなかでカルシウム依存性のある分子種に注目したところ、DGKβのみがファゴサイトーシス時に集積した。活性酸素の産生は、DGK選択的阻害剤で処置すると、特に細胞外への活性酸素産生が著名に増加した。さらにこの阻害剤処置時のβIPKCの集積は著名に増強した。以上のことから、Fcγ receptorを介したファゴサイトーシスにおいて、細胞外への活性酸素の産生は、βIPKCにより制御されており、その調節をDGKβが行っていることがわかった。4,さらにβIPKCの基質であるp47^<phox>も食胞膜に限局的に集積することをつきとめた。以上のことから、Fcγ receptorを介したファゴサイトーシス時における活性酸素の産生は、食胞で限局するように厳密に制御されていることが推測された。そこで電子顕微鏡を用いてFcγ receptorを介したファゴサイトーシス時における活性酸素の産生部位を検索したところ、食胞に限局していた。以上の成果は、現在投稿中である。

Fcγ receptor expression is characterized by the expression of protein, PKC species, Diacylglycerol kinase (DGK) species, GFP labeling, microglia development, IgG labeling, gluttony, confocal labeling, and microscopic observation. 1,PKC molecular species βIPKC εPKC, phagocytic membrane limited to the time of aggregation, the aggregation of the two species is different. In addition, the accumulation mechanism of β IPKC was analyzed in detail. βIPKC was produced in the cell membrane and accompanied by the increase of intracellular cells. 2,βIPKC's function was clarified when it was stimulated by Fcγ receptor, and the inhibitor of PKC's selectivity was determined. Active acid production is (1) extracellular active acid production,(2) intracellular active acid production,(1) completely dependent on βIPKC,(2) partially dependent on βIPKC. 3. The function of PKC is regulated by DGK. The production of reactive acids has been significantly increased due to the treatment of DGK-selective inhibitors, especially extracellular reactive acid production. The accumulation of βIPKC in the treatment of these pollutants has increased significantly. The above Fcγ receptor is involved in the production of extracellular active acids, the regulation of βIPKC, and the regulation of DGKβ. 4<phox>, The above Fcγ receptor is involved in the production and control of active acids. The Fcγ receptor is used to detect the active acid production site. The above results are now published in the journal.