神経系特異的AP-3B複合体・μ3Bサブユニットによる細胞内輸送機構の解析

神经系统特异性AP-3B复合物和μ3B亚基的细胞内转运机制分析

• 批准号: 15700299
• 负责人: 中津 史
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2004
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15700299/
• 关键词: アダプター(AP)複合体; ZnT3; VGAT; ジーロイシン・シグナル; シナプス小胞; 神経伝達物質遊離; LTP; temporoamonic経路

μ3Bに結合するcargo候補分子としては、前年度に引き続き行っていたyeast two-hybrid解析、及びμ3B KOマウスの解析から、小胞型亜鉛トランスポーターZnT3と小胞型GABAトランスポーターVGATに焦点を絞り、解析を行った。ZnT3のC末端側、もしくはN末端側細胞質領域を、Tac(IL2受容体α鎖)及びインバリアント鎖(Ii)に繋いだキメラ蛋白質を作成し、これらをPC12細胞に発現させ、それらの局在を詳細に調べたところ、それぞれの領域にはエンドソーム、及びシナプス様小胞(SLMV)に局在するシグナルが存在することがわかった。そこで種々の変異体を用いて詳細に解析を行ったところ、それぞれの領域には異なる細胞内局在を規定するジーロイシン・シグナルが存在することが判明した。特にC末端側細胞質領域は、トランスゴルジ・ネットワーク(TGN)から細胞膜を経由せず直接エンドソーム/SLMVへの輸送を担っている事も明らかになった。そこで、ZnT3とμ3サブユニットの直接の相互作用を検討するために、GST-ZnT3蛋白質、及び精製μ3A及びμ3B蛋白質を用いてSPR解析を行った1ところ、非常にわずかではあるが特異的な結合が検出された。これらのことからAP-3A/Bは、ZnT3のC末端側細胞質領域に結合し、TGNから直接エンドソーム/SLMVへの輸送に関与する可能性が考えられる。VGATに関してもZnT3と同様なキメラ蛋白を用いて解析を行ったところ、N末側、及びC末側に細胞内局在を規定するシグナルの存在を確認した。特にC末側にはジーロイシン様シグナルが存在し、VGATのエンドサイトーシス、及び細胞内局在に関与する事が明らかになった。

μ 3B was combined with the cargo candidate molecular markers, the previous year, the yeast two-hybrid analysis, the μ 3B KO analysis, the small cell ZnT3, the VGAT focus, and the analysis. ZnT3 C-terminal, N-terminal cell domain, Tac (IL2 receptor alpha) and Ii receptor protein (Ii) protein are made, PC12 cells are not detected, and the location of the cell is detected. And the SLMV office has some information on the location of the cell in the hospital. A wide range of information systems are used to analyze the information of the bank and the field. The internal department of the system is required to determine the accuracy of the information system. At the end of the C terminal, the cell field, the cell area, the cell membrane, the membrane, the cell, the membrane, the cell membrane, the The direct interaction of ZnT3, μ 3 and μ 3A proteins, GST-ZnT3 protein, and sperm μ 3A and μ 3B proteins was performed by SPR analysis. We need to know that AP-3A/B, ZnT3 C-terminal cell field combination, TGN direct transmission

项目成果

Defective function of GABA-containing synaptic vesicles in mice lacking the AP-3B clathrin adaptor.

缺乏AP-3B网格蛋白适配器的小鼠中含GABA的突触囊泡的功能不良。

• DOI: 10.1083/jcb.200405032
• 发表时间: 2004-10-25
• 期刊: JOURNAL OF CELL BIOLOGY
• 影响因子: 7.8
• 作者: Nakatsu, Fubito;Okada, Motohiro;Mori, Fumiaki;Kumazawa, Noriko;Iwasa, Hiroto;Zhu, Gang;Kasagi, Yasufumi;Kamiya, Haruyuki;Harada, Akihiro;Nishimura, Kazuhiro;Takeuchi, Arata;Miyazaki, Taisuke;Watanabe, Masahiko;Yuasa, Shigeki;Manabe, Toshiya;Wakabayashi, Koichi;Kaneko, Sunao;Saito, Takashi;Ohno, Hiroshi
• 通讯作者: Ohno, Hiroshi

中津 史, 高津宏之, 大野博司: "ポストゴルジ・ネットワークにおける小胞輸送"実験医学(増刊). 21・14. 114-121 (2003)

Fumi Nakatsu、Hiroyuki Takatsu、Hiroshi Ohno：“后高尔基体网络中的囊泡运输”实验医学（特别版）21・121（2003）。

F.Nakatsu, H.Ohno: "Adaptor protein complexes as the key regulators of protein sorting in the post-Golgi network."Cell Structure and Function. 28・5. 419-429 (2003)

F.Nakatsu、H.Ohno：“适配器蛋白复合物是后高尔基体网络中蛋白质分类的关键调节因子”。《细胞结构与功能》28·5（2003）。