新規ストレス応答メカニズムに基づく炎症性腸疾患分子標的薬の探索

炎症性腸疾患(Inflammatory bowel disease: IBD)は、腸管組織に炎症や潰瘍を引き起こす疾患の総称で、その原因は不明な点が多い。患者数は年々増加しており、病態機序の解明、および治療薬開発は急務である。本研究では、我々が最近同定した新規ストレス応答メカニズムに着目し、炎症性腸疾患の分子標的薬を探索することを目指している。今年度は、引き続きスクリーニング評価系の構築を行った。本評価系は、我々が新たに見出したストレス応答経路に着目し、その活性化をルシフェラーゼの酵素活性の上昇によって検出するという戦略である。そのため、ルシフェラーゼ活性をノイズを抑えつつ高感度に検出する必要があることから、指標となるルシフェラーゼ活性の検出感度の改善に取り組んできた。ルシフェラーゼフラグメントをN末端に配置する場合とC末端側に配置する場合、そしてそれらをつなぐリンカー配列を様々な組み合わせで評価を行った。リンカーについては長さの異なるフレキシブルリンカーを用いた。また、発光検出に用いる機器に適した培養条件および細胞数の再検討を行った。発現ベクター系の再構築も並行して検討中であり、さらなる改良が必要であると考えられる。これらに加え、スクリーニング評価に向けた個体レベルでの解析を進めた。イノシトールリン脂質制御遺伝子改変モデル動物を用いたトランスクリプトームデータをもとに解析を行ったところ、特に免疫システムおよび炎症に関わるシグナル伝達経路に関与する遺伝子群に大きな変動が見られた。

炎症性腸疾患(Inflammatory bowel disease: IBD)は、腸管組織に炎症や潰瘍を引き起こす疾患の総称で、その原因は不明な点が多い。患者数は年々増加しており、病態機序の解明、および治療薬開発は急務である。本研究では、我々が最近同定した新規ストレス応答メカニズムに着目し、炎症性腸疾患の分子標的薬を探索することを目指している。今年度は、引き続きスクリーニング評価系の構築を行った。本評価系は、我々が新たに見出したストレス応答経路に着目し、その活性化をルシフェラーゼの酵素活性の上昇によって検出するという戦略である。そのため、ルシフェラーゼ活性をノイズを抑えつつ高感度に検出する必要があることから、指標となるルシフェラーゼ活性の検出感度の改善に取り組んできた。ルシフェラーゼフラグメントをN末端に配置する場合とC末端側に配置する場合、そしてそれらをつなぐリンカー配列を様々な組み合わせで評価を行った。リンカーについては長さの異なるフレキシブルリンカーを用いた。また、発光検出に用いる機器に適した培養条件および細胞数の再検討を行った。発現ベクター系の再構築も並行して検討中であり、さらなる改良が必要であると考えられる。これらに加え、スクリーニング評価に向けた個体レベルでの解析を進めた。イノシトールリン脂質制御遺伝子改変モデル動物を用いたトランスクリプトームデータをもとに解析を行ったところ、特に免疫システムおよび炎症に関わるシグナル伝達経路に関与する遺伝子群に大きな変動が見られた。