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神経系特異的AP-3B複合体による細胞内輸送系の解明

神经系统特异性 AP-3B 复合物阐明细胞内转运系统

基本信息

批准号：
17700360
负责人：
中津史
金额：
$ 2.3万
依托单位：
The Institute of Physical and Chemical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2005
资助国家：
日本
起止时间：
2005 至 2006
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17700360/
关键词：
アダプター(AP)複合体細胞内輸送小胞型GABA輸送体(VGAT)

项目摘要

1 AP-3Bのcargo候補分子1;VGATの細胞内局在に関する研究μ3BKOマウスではGABAの放出が顕著に低下していたことから、μ3BはSVに局在する小胞型GABA輸送体(VGAT)の輸送・局在を制御している可能性が考えられた。そこで、このVGATがμ3Bのcargoである可能性を検討した。VGATのアミノ酸配列を調べたところ、細胞質領域にジ-ロイシン(LL)・シグナル様の配列を見いだした。VGATのキメラ蛋白、及びHAタグを導入したVGATの一過性発現による解析から、このVGATのLLシグナルはエンドサイトーシス・シグナルとして機能することが判明した。またPC12細胞を用いた免疫蛍光染色から、VGATとAP-3はvesicle様構造に共局在することも判明した。さらに、VGATにN末端側細胞質領域には、C末端側のLLシグナルとは別の細胞内局在を規定する領域が存在し、別々の機構により細胞内局在が制御されていることがわかった。2 AP-3Bのcargo候補分子2;Nischarinに関する研究μ3Bをbaitにした酵母2ハイブリッド法により、新たにNischarinを単離した。HeLa細胞を用いたHA-Nischarinの一過性発現による生化学的解析により、AP-3がHA-Nischarinと共沈したことから、細胞内においても両者の相互作用が確認された。また、HA-Nischarinを強制発現した細胞では、CD63の細胞内局在に異常が見られたことから、AP-3の輸送系にNischarinは重要な役割を担っていることが明らかになった。NischarinはN末端にPXドメインを有し、それに続くcoiled-coli領域を介してエンドソームに局在することが判明していることから、NischarinはAP-3のエンドソーム膜へのリクルートにも関与している可能性が示唆された。

1 AP-3B and cargo candidate molecules 1;VGAT intracellular regulation related to μ3BKO, GABA release is reduced, μ3B and SV regulation of transport and regulation of VGAT is possible. The possibility of a 3B cargo is discussed. VGAT's amino acid sequence is regulated by the amino acid sequence, and the amino acid sequence in the cytoplasmic domain is regulated by the amino acid sequence. VGAT's protein and HA are introduced into VGAT's transient appearance, and VGAT's LL protein and HA are introduced into VGAT's transient appearance, and VGAT's LL protein and HA are introduced into VGAT's transient appearance. PC-12 cells were identified by immunoluminescence staining, VGAT and AP-3. In addition, VGAT N-terminal cytoplasmic domain, C-terminal LL system, different intracellular domain, different mechanism, different intracellular domain, different intracellular domain, different intracellular domain. 2 AP-3B and cargo candidate 2;Nischarin related research μ3B baits yeast 2; Nischarin related research Biochemical analysis of transient HA-Nischarin expression in HeLa cells, AP-3 and HA-Nischarin co-precipitation, and intracellular interactions were confirmed. Nischarin stress occurs in cells, CD63 cells, and AP-3 cells. Nischarin has a PX terminal and a coiled-coli domain. It is found that Nischarin AP-3 has a coiled-coli domain and a coiled-coli domain.