人工塩基対の利用を目指したDNAポリメラーゼ変異体の作成と評価

旨在利用人工碱基对的 DNA 聚合酶突变体的创建和评估

• 批准号: 15710164
• 负责人: 池田 修司
• 金额: $ 2.11万
• 依托单位: The University of Tokyo (2004)Kagoshima University (2003)
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2003
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2003 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15710164/
• 关键词: 人工塩基; イソグアニン; イソシトシン; 2-oxo(1H)pyridine; チオフェン; 温度感受性大腸菌; polA12; recA56; recB23; Thermus thermophilus; Thermus aquaticus; DNAポリメラーゼ; 非天然塩基

人工塩基イソグアニンとイソシトシンに適したDNAポリメラーゼ変異体を作成する計画は継続中であるが、イソグアニンとイソシトシンはアメリカの研究室で開発されたものであり、日本発の技術とするためには、日本で開発された人工塩基対が必要である。そこで、東京大学先端科学技術研究センター平尾研究室がすでに開発していた2-oxo(1H)pyridine塩基を改良することをまず行った。具体的には、DNA中のウラシル塩基の5位にヘテロ環化合物を導入するとDNA-RNAハイブリッド2重らせんの熱力学的安定性が増加することが知られているので、人工塩基である2-oxo(1H)pyridineでも同様の効果が期待できると考え、ピリミジンの5位にあたる部分にチオフェンを導入したリボヌクレオシドを合成した。2-oxo(1H)pyridineを含むリボヌクレオシド(rY)をNISによりヨウ素化し、チオフェンのスズ化合物を用いたパラジウムカップリングにより5位にチオフェンを導入した。チアゾールの方がより安定になると考えられるが、パラジウムカップリングの収率が低いという問題があった。5位にチオフェンを導入したrYをDMTr化、アセチル化、そして脱DMTr化することにより2'と3'の水酸基がアセチル基で保護されたリボヌクレオシドを合成し、これをLudwig & Ecksteinらの方法で三リン酸の形へと変換した。またリボヌクレオシドをデオキシヌクレオシドへと変換した。

The artificial DNA matrix is necessary for the development of artificial DNA matrix systems in Japan, and for the development of artificial DNA matrix systems. The 2-oxo(1H)pyridine base was developed by the Advanced Science and Technology Research Center of the University of Tokyo. Specifically, the introduction of a cyclic compound at the 5-position of the DNA-RNA moiety increases the thermodynamic stability of the 2-oxo(1H)pyridine derivative. The synthetic 2-oxo(1H)pyridine derivative has the same effect as that of the 2-oxo(1H)pyridine derivative. 2-oxo(1H)pyridine contains the following elements: (rY);(NIS);(NIS); and (NIS). The problem is that the rate of return is low and the rate of return is low. 5-position conversion, conversion The key to the key is to change the key.