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脱ユビキチン化酵素AMSHによる細胞内小胞輸送の制御機構の解析

去泛素化酶AMSH控制细胞内囊泡运输的机制分析

基本信息

批准号：
16770094
负责人：
小嶋克彦
金额：
$ 1.66万
依托单位：
Shinshu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

昨年、エンドソームの肥大化や細胞膜レセプターの分解阻害を誘導するHrsの過剰発現がSTAMの共発現により解消される一方、AMSHによる同様の効果が見られないことを報告した。STAMはそのCoiled-coilドメインを介してHrsと、SH3ドメインを介してAMSHと結合することから、STAMのドメイン欠損変異体(それぞれSTAM-DCC、STAM-DSH3)それぞれをHrsと共発現したところ、共にエンドソームの肥大化を抑制することはできなかった。このとき、STAM-DCCは細胞質中に拡散していたが、STAM-DSH3は肥大化エンドソーム上でHrsと共存していた。この結果は、Hrs-STAM共発現による肥大化エンドソームの解消にAMSHが必要であることを示唆している。さらにこれを検証するため、Hrs-STAM共発現293T細胞にAMSHの脱ユビキチン化活性欠損点変異体AMSH-D348Aを導入したところ、肥大化エンドソームが観察され、それには3者が共存していた。また、この肥大化エンドソームはクラスリンや後期エンドソーム蛋白質であるLAMP3が局在することから、マルチベシキュラボディ(MVB)の形成が阻害されたものと考えられた。そこで、MVB形成に関与するESCRT-I複合体の構成成分であるTsg101のHrs過剰発現293T及びHeLa細胞での局在を観察したところ、本来HrsによりMVBにリクルートされるべきTsg101は肥大化エンドソームには全く存在しなかった。以上のことから、MVB形成に必須であるESCRT複合体のエンドソームへのリクルートにはHrsのみならずAMSHの脱ユビキチン化活性が関与していることが示唆された。

In the past year, the hypertrophic cell membrane degradation inhibition induced by Hrs and the co-occurrence of STAM have been reported. STAM is a Coiled-coil material, such as Hrs, SH3, AMSH, and combinations thereof, and STAM is a material that is loss-deficient (such as STAM-DCC, STAM-DSH3), such as Hrs, Hrs, and SH3. STAM-DSH3 is the most important component of STAM-DCC. The result is that Hrs-STAM co-generation is necessary for the solution of AMSH. Hrs-STAM co-discovery of 293T cells and AMSH de-activation point allogeneic AMSH-D348A co-introduction of Hrs-STAM and AMSH de-activation point allogeneic AMSH-D348A co-discovery of Hrs-STAM and AMSH de-activation point allogeneic AMSH-D348A. The formation of LAMP3 in the late stage of protein production is a barrier to the formation of MVB. The components of ESCRT-I complex related to MVB formation are Tsg101 and Hrs 293T and HeLa cells. The formation of MVB is necessary for the development of ESCRT complex.