DNA相同組換えの制御機構に関わる蛋白質群の構造と機能

DNA同源重组控制机制中涉及的蛋白质的结构和功能

• 批准号: 16770105
• 负责人: 美川 務
• 金额: $ 2.3万
• 依托单位: The Institute of Physical and Chemical Research
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
• 财政年份: 2004
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2004 至 2005
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16770105/
• 关键词: 相同組換え; RecA; RecF経路; NMR分光法

近年,DNA複製フォークの修復にDNA相同組換えが重要であることがわかってきた.DNA傷害などにより複製が停止すると単鎖DNA(ssDNA)領域が生じる.原核生物ではこの領域に単鎖DNA結合蛋白質(SSB)が結合して一時的にその保護を行う.最終的にSSBはRecF経路の蛋白質RecF,RecO,RecRの働きにより,実際に組換え反応を行う蛋白質であるRecAに置換えられ,組換え修復は進行する.しかしながら,現在までそのメカニズムは明らかにされていない.本研究ではこれら相同組換えの制御を行う蛋白質群の働きを詳細に解析することを目的としている.昨年までに,RecF-RecR-RecO-SSB間に相互作用が存在すること,SSBに相互作用するRecOのみではSSBをssDNA上から除去できないこと,SSBの除去にはRecOに加えてRecOに相互作用するRecRが必要であることを明らかにした.そこで,平成17年度はRecRに注目し,その相互作用因子についてNMR分光法を用いて解析した.その結果,RecRはそれ自身ではDNAに強く結合しないこと,また,トップリムドメインにある酸性クラスター領域でRecOに結合することが示唆された.そして,変異体解析を合わせて行った結果,RecRの酸性クラスター領域はRecOだけではなくRecFとの結合にも重要であることが明らかになった.さらに,溶液中でこれらの蛋白質が混在した場合,RecFR複合体が優位に形成され,その複合体はdsDNAに強く結合することが明らかになった.これらの結果から,dsDNAに結合したRecFR複合体がssDNA上のSSBに結合したRecOとRecRのトップリムドメインで相互作用することにより,RecO-SSBをssDNAから解離させていることが示唆された.

In recent years,DNA replication and repair of DNA identical components have become important.DNA damage and replication have stopped. Single lock DNA(ssDNA) fields have emerged. Prokaryotes are the domain of DNA binding proteins (SSBs) that bind to and protect the environment. The final SSB is the protein RecF,RecO,RecR of the RecF circuit, and the final SSB is the protein RecF, RecO, RecR of the RecF circuit. Now we're in the middle of something. This study is aimed at analyzing protein groups in detail. Last year,RecF-RecR-RecO-SSB interaction existed, SSB interaction existed, RecO and SSB interaction existed, RecO and RecO interaction existed, SSB interaction existed, SSB interaction existed, RecO and SSB interaction existed, SSB interaction The interaction factor was analyzed by NMR spectroscopy. As a result,RecR binds strongly to its own DNA and binds strongly to the acidic domain of RecO. The results of the analysis of different species are as follows: RecR is acidic, and RecR is acidic. In addition, when the proteins are mixed in solution, the RecFR complex is formed in an optimal position, and the complex is strongly bound to dsDNA. As a result,dsDNA binds to RecFR complex, SSB binds to RecO and RecR, and the interaction between RecO and RecR and ssDNA dissociates.

项目成果

Multiplex PCR: use of heat-stable Thermus thermophilus RecA protein to minimize non-specific PCR products.

多重PCR：使用热稳定的热嗜热RECA蛋白来最大程度地减少非特异性PCR产物。

• DOI: 10.1093/nar/gni111
• 发表时间: 2005-08-08
• 期刊: NUCLEIC ACIDS RESEARCH
• 影响因子: 14.9
• 作者: Shigemori, Yasushi;Mikawa, Tsutomu;Shibata, Takehiko;Oishi, Michio
• 通讯作者: Oishi, Michio

Backbone ^1H, ^<13>C, and ^<15>N assignments of a 42 kDa RecR homodimer.

42 kDa RecR 同二聚体的主链^1H、^13C 和^15N 分配。

• 发表时间: 2004
• 期刊: Journal of Biomolecular NMR 28・2
• 作者: Masayoshi Honda;Sundaresan Rajesh;Daniel Nietlispach;Tsutomu Mikawa;Takehiko Shibata;Yutaka Ito
• 通讯作者: Yutaka Ito

等温増幅可能な鎖置換DNAポリメラーゼを用いたテンプレートDNA分子の増幅方法

使用能够等温扩增的链置换DNA聚合酶扩增模板DNA分子的方法

• 发表时间: 2004