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暑熱に起因する酸化ストレスがウシ初期胚に与える障害の評価と制御

热诱导氧化应激对早期牛胚胎损伤的评估和控制

基本信息

批准号：
16780209
负责人：
阪谷美樹
金额：
$ 1.34万
依托单位：
National Agriculture and Food Research Organization
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2006
项目状态：
已结题

项目摘要

初期胚発生における高温処理がストレスおよび酸化還元反応に関連する遺伝子発現に及ぼす影響について検討を行った。屠場由来卵巣由来の牛卵子を体外受精した胚を用いた。体外受精後38.5℃培養したものを対照区、体外受精後2日目に41℃ 6時間処理を行った胚を高温処理区とした。高温処理終了直後、高温処理終了24時間後に対照区、高温処理区ともに胚のサンプリングを行い、mRNAを抽出後RT-PCRにて遺伝子発現を検討した。遺伝子の発現は、内部標準に対する発現率で算出した。検討遺伝子は、内部標準としてHiston H2a、ストレス関連遺伝子としてHSP70、抗酸化関連遺伝子としてGPx、GCS、Mn-SODを用いた。1.高温処理直後のタイミングでサンプリングした胚の遺伝子発現量に対照区、高温処理区による違いは認められず、24時間後のサンプリングでは対照区、高温処理区に遺伝子発現量の差がある傾向が認められたことから、高温曝露後に胚における遺伝子レベルでの反応には24時間はどの時間が関わることが明らかとなった。2.24時間後のサンプリング胚では、高温処理区により対照区と比較してストレスタンパク質HSP70及び過酸化水素の還元に関与するGPxの発現が増大し、グルタチオン合成に関わるGCSは逆に減少する傾向が認められた。この結果は熱ショックタンパクの発現亢進が進むことを示唆し、さらに高温曝露によって増加した活性酸素類を除去する機構としてグルタチオンが大きく関わっていることを示唆している。3.スーパーオキサイド除去に関わるMn-SODでは高温処理による発現の変化は認められなかった。Mn-SODは主にミトコンドリアに存在する酸化還元酵素であるが、この結果から牛初期胚のスーパーオキサイド除去機構にMn-SODが関与している可能性は低いことが示唆された。

During the initial stage of embryo development, high temperature treatment was carried out to investigate the relationship between seed development and acidification. In vitro fertilization of bovine eggs After in vitro fertilization, 38.5℃ and 41℃ were cultured for 6 days. After the end of high temperature treatment, 24 hours after the end of high temperature treatment, the expression of mRNA in the corresponding region, the high temperature treatment region and the mRNA extraction region was examined by RT-PCR The probability of occurrence of the virus and internal standards is calculated. The internal standards of H2a, HSP70, GPx, GCS and Mn-SOD are used. 1. After high temperature treatment, the difference of the amount of the seed produced in the irradiation area and the high temperature treatment area after 24 hours tends to be recognized. After high temperature exposure, the seed produced in the irradiation area and the high temperature treatment area after 24 hours is recognized. 2.24 After time, the occurrence of GPx increased and the occurrence of GCS decreased in comparison with the occurrence of HSP70 and the occurrence of HSP70 in the high temperature treatment area. The results are as follows: 1. The development of heat and oxygen is enhanced, and the mechanism of removing active acids is enhanced. 2. The development of heat and oxygen is enhanced. 3. 3. Mn-SOD is a new type of enzyme that can be removed by high temperature treatment. Mn-SOD is the main enzyme in the presence of acid reducing enzymes, and the results are very low in the presence of Mn-SOD.