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ベロ毒素の高感度迅速検出法の開発研究

一种高灵敏快速检测维罗毒素方法的研发

基本信息

批准号：
16790026
负责人：
三浦剛
金额：
$ 2.3万
依托单位：
Chiba Institute of Science
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16790026/
关键词：
ベロ毒素検出法 Gb3 蛍光偏光 O-157 病原性大腸菌

项目摘要

腸管出血性大腸菌O-157の産生するベロ毒素は死亡率の高い溶血性尿毒症症候群を引き起こすために大きな社会問題となっている。しかし,その治療には抗生物質,止瀉薬が効果的に作用せず,未だに有効な治療薬の開発には至っていないのが現状である。そこで,O-157による被害を最小限に抑えるためにはベロ毒素を迅速に検出し,原因食品を速やかに特定する必要がある。しかし,従来法のバイオアッセイ法では正確に検出できるが,4日程度の時間を必要とする。また,PCR法や抗原抗体法では数時間から24時間で分析できるものの判定誤差が生じる。従って,より迅速かつ正確にベロ毒素を検出できる方法論の開発が待ち望まれている。そんな中,蛍光標識した低分子化合物とタンパクとの結合は蛍光偏光度測定により瞬時に高感度検出できることが最近明らかになった。また,ベロ毒素が認識結合するヒトの細胞表面の受容体はスフィンゴ糖脂質Gb3の糖鎖部分である。従って,蛍光標識化したGb3糖鎖を用いて蛍光偏光度測定することによって,ベロ毒素を迅速かつ高感度に検出できると考えられる。蛍光標識基としてダンシル基およびフルオレセイン基をGb3,およびGb2糖鎖に導入したベロ毒素検出化合物の合成に成功した。これらのサンプルの内,フルオレセイン基を導入したGb3糖鎖がガラクトース糖鎖認識レクチンBS-1と結合することを,蛍光偏光度測定によって高感度に検出できることが明らかとなった。現在,より毒性の強い2型のベロ毒素の検出評価試験を検討中である。

Intestinal hemorrhagic coli O-157 produces high mortality rate and hemolytic uremic syndrome, which causes large social problems.しかし, そのtreatment にはantibiotics, antidiarrheal 薬がeffectにeffectせず, だにeffectiveなtreatment薬の开発には to っていないのがcurrent situation である.そこで, O-157 による was killed を minimum limit にえるためにはベロ toxin を rapid に検し, reason food を speed やかに specific する necessary がある.しかし, 従来法のバイオアッセイ法ではcorrect に検出できるが, 4-day degree の Time とする.また, the PCR method, the antigen-antibody method, the counting time, the 24-time analysis, the determination error, and the error.従って,よりrapidlyかつcorrectにベロtoxicを検出できるmethodologyの开発が Waitちwangまれている.そんな中, 蛍光LOGO したlow molecular compound とタンパクとの combines は蛍光skew Photometry is a high-sensitivity instantaneous test.また, ベロ toxin が recognition binding するヒトの receptor on the cell surface はスフィンゴ glycolipid Gb3 の sugar lock part である.従って, Gb3 sugar lock したGb3 sugar lock をUsing いて蛍Light polarization measurement することによって, ベロ poison をかつ high sensitivity に検出できると考えられる. The synthesis of the としてダンシルbase およびフルオレセインをGb3 and the およびGb2 sugar-locked にintroduced したベロtoxin was successfully carried out.これらのサンプルの内, フルオレセインを Import したGb3 Sugar Lock がガラクトース Sugar Lock Know レクチンBS-1 is a combination of high sensitivity and high sensitivity for polarization measurement. Now, the toxic and toxic type 2 のベロ toxin の検 is released and the test is completed.